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【求助】安捷伦1200LC测定草酸求助

ttxiangshang

2009/03/24

液相色谱（LC）

大家好，第一次做液相，想请教各位一些问题，非常感谢各位的解答。

我先把基本情况介绍一下：
安捷伦 $$lc 1200 测定草酸，草酸（优级纯），所有用水均用超纯水配制。

测定条件：0.5mL/min(压力：50bar)，柱温恒定30.0℃，停留时间15min，
pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为55：45。

柱子：Luna 5µ C18(250mm*4.6mm*5µm)

（文献上的方法是：用C18的(250mm*4.6mm*5µm)，流速1.0mL/min，柱温：30℃，停留时间3min，pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为80：20，我按照这种方法做不出来，三分钟太短，峰都还没有出来.)

出峰时间随浓度不同而有变化，
1 ppm的时候在11.533min峰面积是100%，
5 ppm的时候在8.707和11.519min时均有峰，峰面积分被是70%和30%，
10 ppm的时候在8.706和11.532min时峰面积分别为78&和22%。

改变了溶液和乙腈的体积比（从80：20，75：25，70：30，65：35，60：40，55：45，50：50），发现只有55：45时出的峰要少点，峰面积在尖峰处要大些（我不懂如何判定什么样的峰才是比较好），改变流量，从0.3，0.4，0.5，0.6，1mL/min发现1mL/min压力有110左右，后面还是用了0.5。

想请教的问题是：
如何摸索测定草酸的最佳条件，需要改变哪些参数,如果各位有做过相关的或是能给我宝贵意见的，十分感谢。

我知道很多基础的东西还需要学习，我也正在学习，想借助论坛的平台和有经验的网友交流，谢谢。

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〓猪哥哥〓

第1楼2009/03/24

呵呵。也感谢与大家交流。
一般如果色谱条件改变一点，峰面积肯定是不同的。有的是因为最大吸收问题，有的是流动相极性的不同。
一般最好是选用标准（药如典）的方法来做，这样做才具有比较性，如果标准上的做不出来，可以在标准的基础上做一些改变。但最好检测波长不做改变，可以调整流动相比例，1mL/min发现1mL/min压力有110左右，压力不不大的。不用担心。
ttxiangshang 发表:大家好，第一次做液相，想请教各位一些问题，非常感谢各位的解答。

我先把基本情况介绍一下：
安捷伦 $$lc 1200 测定草酸，草酸（优级纯），所有用水均用超纯水配制。

测定条件：0.5mL/min(压力：50bar)，柱温恒定30.0℃，停留时间15min，
pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为55：45。

柱子：Luna 5µ C18(250mm*4.6mm*5µm)

（文献上的方法是：用C18的(250mm*4.6mm*5µm)，流速1.0mL/min，柱温：30℃，停留时间3min，pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为80：20，我按照这种方法做不出来，三分钟太短，峰都还没有出来.)

出峰时间随浓度不同而有变化，
1 ppm的时候在11.533min峰面积是100%，
5 ppm的时候在8.707和11.519min时均有峰，峰面积分被是70%和30%，
10 ppm的时候在8.706和11.532min时峰面积分别为78&和22%。

改变了溶液和乙腈的体积比（从80：20，75：25，70：30，65：35，60：40，55：45，50：50），发现只有55：45时出的峰要少点，峰面积在尖峰处要大些（我不懂如何判定什么样的峰才是比较好），改变流量，从0.3，0.4，0.5，0.6，1mL/min发现1mL/min压力有110左右，后面还是用了0.5。

想请教的问题是：
如何摸索测定草酸的最佳条件，需要改变哪些参数,如果各位有做过相关的或是能给我宝贵意见的，十分感谢。

我知道很多基础的东西还需要学习，我也正在学习，想借助论坛的平台和有经验的网友交流，谢谢。

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老多_小多

第2楼2009/03/25

用C18的(250mm*4.6mm*5µm)，流速1.0mL/min，柱温：30℃，停留时间3min，pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为80：20，这个条件不可能做的出来，草酸不不保留的物质，而方法的比例乙腈20%，本身就有问题

0

ttxiangshang

第3楼2009/03/25

我再查查资料，有问题再贴上来向大家请教，谢谢！

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wenyan-lu

第4楼2009/03/25

不用乙腈,纯酸性盐溶液好了,选个耐纯水的C18柱,柱温低一点更好;草酸应很灵敏的

0

深海游鱼

第5楼2009/03/26

可以加入一些离子对试剂比如TBA等试一下。

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