【求助】论文中标准曲线中的数据问题

标准曲线是配制不同浓度的藏红花素标准品溶液Ci，分别测定吸光度Ai，以吸光度A对浓度C所绘制的曲线（实际应为一条直线）。
提取率的的计算方法：由测得的某份样品溶液的吸光度A，从标准曲线上求出相应的浓度C。由求得的C及样品溶液的稀释倍数（假设测定溶液是经过稀释的）n求出样品溶液的原始浓度C2=C×n。C2乘以样品溶液的体积V求出样品中藏红花素的量W=C2×V。W除以测定时称取的样品重量W0，就是提取率。

但是我现在只有藏红花素处理后得到的样品，这样的话如何去绘制标准曲线呢？
下面是我实验过程。很想请各位大侠模拟一下试验1-8的数据（大概范围也行）。。。。A440值和提取率。。。


栀子果实粉末20g用80ml 95%乙醇进行索式回流提取滤去不溶物将滤液收集起来放置烧杯中待用。

将滤液放入旋转蒸发器中进行蒸发，5min后得到约10ml栀子黄色素溶液。

从10ml浓缩的栀子黄色素溶液中取1ml进行稀释，先稀释2000倍，然后进行分光光度计测量溶液中栀子苷和藏红花素的吸光值A238和A440,测量结果得到A238栀子苷吸光值为0.770, A440藏红花素的吸光值为0.321 , A238和A440的比值为2.399,故其比值大于2可以得知溶液中栀子苷含量远大于藏红花素含量,接下来实验中进行栀子苷和藏红花素的分离即可得到高纯度的藏红花素.

配置展开剂氯仿:无水乙醇=2:1，跑完薄层后用小刀刮下点样点处未动的
点（跑动的点为栀子苷色素），刮下后加5ML蒸馏水进行离心取上清液，将上清液进行紫外分光光度计检测，测量出的A238 为0.255,A440为0.523,故其比值为0.488小于0.7,且与之前比值2.399相比有了大幅度下降,证明硅胶吸附试验成功洗脱了大量栀子苷,收集到了纯度较高的藏红花素

附件里更详细点。
在那里？

你以上的实验设计还有些问题：
1. 极限（或最大限度）提取量未知，无法计算提取率。
2. A440处的吸光度值中包含的干扰物贡献未知，测到的吸光度不是藏红花素的吸光度，没法扣除干扰物的影响。因此算不出藏红花素提取的量。

对以上第一点，你可以选择一个较好的萃取条件，使用索氏萃取器，通过延长时间（比如说，萃取50-80个循环），萃取至溶液A440吸光度不再提高（恒定）为止。这时溶液定容后的吸光度基本上代表了最大提取量，当然其中也还含有干扰物的贡献。

对于以上第二点这比较麻烦，但是可以在你的层析试验基础上来解决。
（待续）

续4楼回帖。

对于以上第二点这比较麻烦，但是可以在你的层析试验基础上来解决。

跑完薄层后用小刀刮下点样点处未动的点（藏红花素），另外刮下样品展开路径上其余部分的全部硅胶粉末。第一个粉末含有要测的藏红花素，第二个粉末含有其他全部干扰物。
然后用溶剂分别完全萃取这两个粉末，然后定容。再分别测这两个溶液A440处的吸光度（A1，A2）。则A440处，萃取液中藏红花素的实际吸光度应该可以用以下方法计算：
A（藏红花素，实际）= A（萃取液）*（A1/（A1+A2））

提取率 = 每次试验的“A（藏红花素，实际）”/ 最大限度提取条件下的“A（藏红花素，实际）”

以上计算过程中不要忘了乘上实际的稀释倍数！
另外提一下，你没有标准品，只能计算相对值，标准曲线的含义不清，不要为好！

无标准品时，建议你：
1.查一下藏红花素的吸收系数，用吸收系数计算。此时，应使用谱带宽度不大于2nm的光度计测定吸光度。
2.也可以用你从薄层板上洗脱下来的藏红花素（假设可得到一定量（至少数mg）固体的话）做标准品。此时，应对其纯度进行检查，其方法可用薄层扫描法，点样量应适当多些，例如100μg，展开后应无杂质斑点，若有杂质斑点，在薄层扫描仪上扫描后，按峰面积归一化法计算，所以杂质应小于1%。
3.若上述两点都做不到，就按楼上专家的建议吧。