【求助】在C4和C18都没有保留的蛋白质，求高手帮忙分析下

先把你的方法说出来，详细一点，以前有没有做过，以前是否正常还是现在异常。这样才好帮你。

谢谢呀，全新的蛋白，分子量56KD,等电点5.6。没什么方法（要自己弄方法），目的是检测样品中目标蛋白的纯度，因为纯化后还会有其他蛋白。我做的时候就是用常规的梯度洗脱，现在的主要问题是目标蛋白会很快的出来（1倍柱体积的样子）。使用流动相PH分别为3.0，7.0，9.0三种洗脱，乙腈比例在5％-90％之间都是一样的，全部是在一倍柱体积左右出峰，倒是杂蛋白老老实实在后面排着队

什么蛋白质的极性这么强啊？
换正相看看

会不会是分子量太大了,分子量大了,样品就不会进入多孔硅胶小球,直接在穿透硅胶颗粒,这样就造成出峰特别靠前

我记得300A的柱子一般是用于分子量低于20kD的小分子蛋白分离的,你这个56kD有点大了

还没用过正相呢，老大能不能给点提示，好比用什么样的柱子什么样的流动相
另外蛋白是我们这边设计的一种乙肝核心抗原，据说是有几个强极性区域的。

用氨基柱或者氰基柱试试
流动相换成正己烷和水
在使用之前，要用甲醇清洗管路过渡的

收到，谢谢了，这就去定柱子。

弱弱的问专家两个问题：正己烷与水能放在一起做流动相吗?互溶吗？一个非极性一个强极性 反相与正相过度是不是用异丙醇吧？

偶不懂呢，等着看大家的讨论