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【求助】请教新毛细管活化方法及其目的?

  • nkmacromer
    2009/08/25
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 本人是毛细管的新手,近期用以下方式活化毛细管(河北永年),甲醇15min,1M HCl 15min,1M NaOH 60min ,0.1M NaOH 120min, 在0.1 NaOH中过夜。第二天0.1M NaOH 15min ,水 15min ,运行缓冲液 30min .然后开始运行测试样品。经常遇到不出峰,或者出峰但走了几个样品后,就不行了。特地来请教各位毛细管电泳的高手,介绍一下你们的活化方式,帮我看看我的问题出在哪里,以及各步骤的活化目的。万分感谢!!!
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  • chx229

    第1楼2009/08/25

    一般活化及冲洗的的步骤:
    甲醇5-10分钟(目的:洗去毛细管在制作过程中带来的矿物油和脂类)
    0.1M NaOH 15-30 分钟(目的:平滑毛细管的内表面;活化硅羟基。这一步骤中如果使用1M NaOH ,则缩短此步的冲洗时间5分钟就够了)
    水,缓冲液各5-10分钟。(目的:水洗去NaOH,缓冲液平衡毛细管)

    你用的活化中,NaOH冲洗的时间太长,而且根本没有必要还保存在NaOH中过夜,NaOH不是冲洗得越多越好的,它是会腐蚀毛细管,降低毛细管的寿命的。当然你不出峰的原因也可能还有其他原因。但是这种活化的方法肯定是不可以的。

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  • sunpengwjh

    第2楼2009/08/26

    一楼说的很有道理,先用甲醇,然后盐酸,氢氧化钠1M,氢氧化钠0.1M,最好用0.1氢氧化钠冲洗到基线比较平稳,然后再用水冲洗,不应该放置过夜!

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  • sunpengwjh

    第3楼2009/08/26

    第一点是除去一些生产过程中引入的杂质。
    第二点是使硅氧键解离,生成硅羟基,在缓冲溶液里面硅羟基可以生成双电层,是产生毛细管电泳的驱动力电渗流的原因,从而达到使部分带电性差异物质更好的分离,即引入分离的因素。

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  • i_am_ling

    第4楼2009/09/02

    楼主问题解决了么?

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  • 小雨哥

    第5楼2009/09/08

    我现在做的时候主要就是先用甲醇冲洗,再用1M的氢氧化钠冲30分钟,然后用0.1M的氢氧化钠冲至基线平稳后再用水冲,再用缓冲液冲,就可以了。

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  • 小冬1106

    第6楼2014/08/16

    您好,我想问一下这个冲洗活化柱子需要压力吗?要多大的?看到有的说20psi,换成mbar那是很大的?可以吗?

    chx229(chx229) 发表:一般活化及冲洗的的步骤:
    甲醇5-10分钟(目的:洗去毛细管在制作过程中带来的矿物油和脂类)
    0.1M NaOH 15-30 分钟(目的:平滑毛细管的内表面;活化硅羟基。这一步骤中如果使用1M NaOH ,则缩短此步的冲洗时间5分钟就够了)
    水,缓冲液各5-10分钟。(目的:水洗去NaOH,缓冲液平衡毛细管)

    你用的活化中,NaOH冲洗的时间太长,而且根本没有必要还保存在NaOH中过夜,NaOH不是冲洗得越多越好的,它是会腐蚀毛细管,降低毛细管的寿命的。当然你不出峰的原因也可能还有其他原因。但是这种活化的方法肯定是不可以的。

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  • 小冬1106

    第7楼2014/08/17

    您好,我想请问一下,这个活化毛细管时需要加电压吗?需要压力冲吗?还是直接在软件上选flush?谢谢

    sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:一楼说的很有道理,先用甲醇,然后盐酸,氢氧化钠1M,氢氧化钠0.1M,最好用0.1氢氧化钠冲洗到基线比较平稳,然后再用水冲洗,不应该放置过夜!

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  • ericwong

    第8楼2014/08/18

    活化的时候是用压力冲,不加电压

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  • nini2006

    第9楼2014/08/18

    只要溶液能进去毛细管里,你想怎么来就怎么来。。。。

    小冬1106(v2785634) 发表:您好,我想请问一下,这个活化毛细管时需要加电压吗?需要压力冲吗?还是直接在软件上选flush?谢谢

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  • nini2006

    第10楼2014/08/18

    只要溶液能进去毛细管里,你想怎么来就怎么来。。。。

    小冬1106(v2785634) 发表:您好,我想请问一下,这个活化毛细管时需要加电压吗?需要压力冲吗?还是直接在软件上选flush?谢谢

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