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【求助】HPLC分析多个氨基酸梯度洗脱时分不开

液相色谱(LC)

  • 我用的流动相是A:0.1mol/l乙酸钠-乙腈97:3,B:乙腈-水80:20
    在15min-19min调比例为B泵15%,对照品的峰在这一时段分离度不很高,样品没分开,我调动几个比例都没什么改变,一直调到B泵2%,样品才分开些,但不知怎么多出来几个小些的峰,且时间延迟对后面峰分离也很有影响。想问各位是我设的梯度有问题,还是机器的比例阀出问题啦?因为别人做液相调两个点就会改变很大,而我几乎没改变。
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  • 柏坡

    第1楼2009/08/28

    你这个方法成熟吗?当你改变B的比例有些小峰出现,时间肯定会延迟的,你的柱子状态怎么样?一般可能是柱子问题,比例阀出问题很少。

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  • It is me!

    第2楼2009/08/29

    你应该是做氨基酸衍生了吧?这个比较难做哦。。。

    不知你的小峰有多大?影响你的目标峰吗?

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  • tangpozi

    第3楼2009/08/30

    做氨基酸衍生的文献也有一些,但好像没有用在阿胶上的,我用别人文献里的梯度有些峰就分不开,我的柱子是根旧柱子,柱效不高,老师说让先试着。我在想是不是我梯度调的不对

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  • tangpozi

    第4楼2009/08/30

    是氨基酸的衍生啊,好麻烦的,而且会有衍生试剂留的杂质峰。那几个小峰和大峰有部分重叠,再分下去时间太长了

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  • hujiangtao

    第5楼2009/09/02

    应助达人

    一般都要衍生呀

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  • yuan_log

    第6楼2009/09/02

    我一般都是用WATERS的氨基酸分析包做氨基酸的,效果还算好,建议楼主看看相关资料,呵呵。
    送上一份说明吧
    我的石头^_^

    tangpozi 发表:是氨基酸的衍生啊,好麻烦的,而且会有衍生试剂留的杂质峰。那几个小峰和大峰有部分重叠,再分下去时间太长了

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  • tangpozi

    第7楼2009/09/21

    谢谢你啊,现在才回复你,我用的是PITC,不能再改其他了,要是有也用PITC做衍生化的可以交流下就好

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  • laott

    第8楼2009/09/24

    柱前衍生化后用C18柱做17种氨基酸分的还可以的,可能是你的柱子不好吧

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  • tangpozi

    第9楼2009/09/24

    我17个峰还挺好的,还有2个不知没出来还是怎的,胱氨酸和半胱氨酸会重叠在一起不?今天我进了一针水和乙腈混合液体想洗一下进样阀,结果出来的居然也有那一大坨杂峰,真不知怎么去掉了

    laott 发表:柱前衍生化后用C18柱做17种氨基酸分的还可以的,可能是你的柱子不好吧

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  • congmingdeyu

    第10楼2009/12/07

    我觉得柱前衍生做氨基酸 定性还可以 定量计算时候感觉不好 相差比较大

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