《第二届网络原创作品大赛》薄层色谱浅见【更新中】

关于薄层现在讨论的越来越少了。从薄层色谱的使用和讨论人气也可以看出。为什么呢？个人觉得原因有：现代仪器的先进性。很多仪器对于药品尤其是西药，可以直接定量，更别提定性了。只要保留时间，在同一条件下进对照品一看就知道。如果还不能肯定，查看光谱信息，还不能确定，采用质谱检测器总可以吧；一个是药品薄层鉴别条件的成熟。很多中药和制剂采用的鉴别包括显微鉴别，薄层鉴别和少数的化学鉴别。其条件已基本确定，只需要直接采用即可。即使改变，在原来的基础上做些改善即可。但是薄层一定时期内是不会被淘汰的。西药由于成分的单一和仪器功能的完备，已经离开薄层的鉴别方法，仪器鉴别和化学鉴别成为它的主要鉴别手段。但是对于中药，中药成分复杂，通过仪器鉴别单一成分未免太过于片面，如果指纹图谱用于鉴别，那将是宣判薄层的终结了。指纹图谱由于受影响因素很多，往往很多不能重现，如不同产地，不同气候，不同水质，不同空质等都会对其成分有所影响。就是一块田里面种出来的，田头和田尾的就不一样。所以GAP的实施对中药指纹图谱将会起到举足轻重的作用。现2005年版药典增补版中已经增添三种成药采用指纹图谱进行质量控制，期中两种为注射液，一种为胶囊制剂。指纹图谱的未来是光明的，但是黎明还没有到来，仍需要在黑暗中再度摸索一段时间。薄层色谱具有鉴别整个药材的优点，通过点样对照品、对照药材，阴性样品和样品，不仅可以鉴别药材中某一个成分，还可以通过对对照药材比对进行鉴别。

好了，先看看一些做的比较好的薄层图片吧。欣赏一下：

二、不同板子的区别
薄板层析法常用的吸附剂有硅胶和氧化铝：
硅胶H——不含粘合剂和其他添加剂的层析用硅胶。
硅胶G——含燃烧过的石膏(CaS04•1/2H20)作粘合剂的层析用硅胶。G代表石膏（gypsum)。
硅胶HF254——含荧光物质层析用硅胶，可用于254nm的紫外光下观察荧光。
硅胶GF254——含煅烧石膏、荧光物质的层析用硅胶
氧化铝也类似地分为氧化铝G、氧化铝HF254、及氧化铝GF254。除了煅石膏外，羧甲基纤维素钠也是常用的粘合剂。由于氧化铝的极性较强，对于极性物质具有较强的吸附作用，因而它适合于分离极性较弱的化合物（如烃、醚、卤代烃等）。而硅胶的极性相对较小，它适合于分离极性较大的化合物（如羧酸、醇、胺等）。还有硅藻土、硅藻土G、微晶纤维素、 微晶纤维素F254等

至于选择什么H板还是G板其差别不是很大。我做过用同一条件同一样品下对两种硅胶进行了比较发现整体差别不大，其主要差别在于：RF值大小有点差异，加入粘合剂的，G板，其RF值较小；一个是样品拖尾现象。硅胶H板上样品点清洗，中间没有带状的出现，整体看起来比较明朗；还有就是有些成分在G板上容易分解，不应选择硅胶G板。

应助达人

漂亮的斑点，精彩的文章。现在钻研和精专薄层的人很少了。都去弄仪器去了。

三、展开剂的选择

关于薄层展开剂的选择网上也有很多报道，如：
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060619/461880/

http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20091001/2137800/

我谈谈自己的感想：
1、必须了解各个常用有机溶剂极性大小。这个是前提。只有知道了各个有机溶剂的极性大小，才能够选择合适的展开剂。
常用溶剂的极性顺序: 水(极性最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六环>四氢呋喃>甲乙酮>正丁醇> 醋酸乙酯>乙醚>异丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>氯丙烷>甲苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>庚烷>煤油(极性最小)。
具体的药物根据其结构参照http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060619/461880/
进行选择。
2、如果被测物质为未知成分时，需先用低极性的单一展开剂进程测试，如果样品点在原地不同，或RF值非常小的时候，需要增大展开剂的极性。相反，如果样品跑到展开剂的顶端，则需要用低极性的展开剂进行展开。但是应该注意的时候，能够用一种展开剂进行展开的并不多见，大多数都是混合有机溶剂。对于未知成分也可以先滴一滴到板子上，待其溶剂挥发完全后，用展开剂滴入，看看其展开情况，如果呈现环状分布，说明该展开剂可行。
3、一般展开剂的选择模式是：展开剂的极性与样品成分极性呈正比，吸附剂与样品极性呈反比。也即如果要分离的样品极性较大，则需要增大展开剂的极性来提高洗脱能力，提高分离度。
4、斑点拖尾也是常见的问题：一个原因是点样量过载，通过减少点样量或降低样品浓度来达到要求。一个原因是因为样品处于离子状态，这和液相的原理是一样的。需是展开剂（流动相）PH=PKa+_2,酸性样品，通过加入乙酸，磷酸或甲酸来改善分离效果，对于碱性样品，如生物碱类成分，可以在制备硅胶的时候加入少许NaOH来改善！

四、操作步骤及观察斑点

1、操作步骤中国药典上有，想做过薄层的都会操作。我主要谈谈我的经历。
1）研磨的时间要长，很多时候硅胶研磨时间不够长，板子就不够平坦
2）注意朝一个方向研磨，这样气泡就会少点，同时注意匀速。
3）展开缸一定在使用前饱和，防止溶剂蒸汽压不同，同时柱子放进去需饱和10-15min左右
4）有些斑点可能需要烘一会儿才可以很清晰的显示出斑点，注意温度不可过高，导致板子碳化
5）在拍摄斑点的时候，最好选择暗室，相机垂直拍摄。




2、观察斑点
显色剂可以分成两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂；另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。
1）碘显色
碘显色对大多数成分均有响应，除了不带有不饱和基团的烷烃类物质。
具体的原理见下：
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20090826/2078206/
2）通过紫外灯观察
这个最方便，最简单的观察斑点方法。
3）常用的显色剂及配置
下载地址为：
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060329/376902/

五、实例及注意事项

我谈谈我自己对薄层做的一些体会、心得和注意事项，也欢迎板油一起交流。


注意事项
1、展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为好
2、薄层板点样后，应待溶剂挥发或用吹风机吹干后再点下一个点。
3、展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。
4、Rf值一般控制在0.3～0.8，当Rf值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。