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【讨论】毛细管实验中的几个问题!

  • tobybabyholy
    2009/10/22
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 本人初做毛细管电泳,管子是永年的,最近用了50μm做,缓冲液硼砂PH9,处理时用的1MOL/LNaOH冲了40MIN,然后做但是基线很不稳定不知道为什么!是不是新管子一定要先用酸,再用碱处理迷茫中,今天换了75μm新管子,先用1当量的碱液冲洗40MIN,然后做,还是基线不平,而且电流到了100μV,迷茫啊!现在基线不稳的问题还不知怎么解决……有高手帮帮吧!
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  • sunpengwjh

    第1楼2009/10/22

    建议用1M氢氧化钠冲洗后再用0.1M的氢氧化钠冲洗柱子,冲到基线基本平直,让后用水冲洗,最后用缓冲溶液冲,这样在用用试试!也可以参考我今天刚发的原创帖子《一些区带电泳毛细管柱子的处理方法》,仅作参考!

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  • spying

    第2楼2009/10/22

    柱子处理有问题,只用1M的氢氧化钠冲了,应该还有缓冲溶液!

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  • tobybabyholy

    第3楼2009/10/23

    谢谢,今天找到原因了,是我样品处理的问题!感谢!!

    sunpengwjh 发表:建议用1M氢氧化钠冲洗后再用0.1M的氢氧化钠冲洗柱子,冲到基线基本平直,让后用水冲洗,最后用缓冲溶液冲,这样在用用试试!也可以参考我今天刚发的原创帖子《一些区带电泳毛细管柱子的处理方法》,仅作参考!

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  • sunpengwjh

    第4楼2009/10/23

    样品处理那里出现了问题?能否和大家分享一下!

    tobybabyholy 发表:谢谢,今天找到原因了,是我样品处理的问题!感谢!!

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  • guocc007

    第5楼2009/10/24

    通微仪器公司的安装测试上是这么写的:
    毛细管平衡顺序
    甲醇冲洗5min,水冲洗2min;1mol/L盐酸冲洗5min,水冲洗2min;0.1mol/LNaOH冲洗10min,水冲洗2min;最后用缓冲液平衡15min。

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  • cpudaxiao

    第6楼2009/10/24

    1M的NAOH 冲40分钟明显是冲洗条件太强了,一般活化时也就5-10分钟,每天使用之前也就是冲2-3分钟就好了,并且如果不是分离蛋白就不建议在两次分离之间使用浓碱的。

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  • tobybabyholy

    第7楼2009/10/27

    我的样品是标准品,用纯甲醇溶解,一个做过的师兄说不行,要用缓冲液去溶,还没有去做呢,这几天在提药材,想再重新处理一下管子,先冲一下,看看基线平不平,同时有个问题,标准品用纯甲醇溶不行吗?

    sunpengwjh 发表:样品处理那里出现了问题?能否和大家分享一下!

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  • tobybabyholy

    第8楼2009/10/27

    这个……好像是进口柱子的处理方法,我用的是国产的,真便宜,不过也好,做不好就换一段,才几十块一米!

    guocc007 发表:通微仪器公司的安装测试上是这么写的:
    毛细管平衡顺序
    甲醇冲洗5min,水冲洗2min;1mol/L盐酸冲洗5min,水冲洗2min;0.1mol/LNaOH冲洗10min,水冲洗2min;最后用缓冲液平衡15min。

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  • tobybabyholy

    第9楼2009/10/27

    新的管子,还没有用过,先用浓碱冲,然后用0.1的碱冲,再用水,再缓冲溶液,这样下来的!

    cpudaxiao 发表:1M的NAOH 冲40分钟明显是冲洗条件太强了,一般活化时也就5-10分钟,每天使用之前也就是冲2-3分钟就好了,并且如果不是分离蛋白就不建议在两次分离之间使用浓碱的。

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  • sunpengwjh

    第10楼2009/10/27

    您是怎么处理的?处理后用起来效果怎么样?

    tobybabyholy 发表:新的管子,还没有用过,先用浓碱冲,然后用0.1的碱冲,再用水,再缓冲溶液,这样下来的!

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