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[求助]结构相似的氨基酸毛细管分离时,在碱性条件下完全重合,如何进行分离?

毛细管电泳(CE)

  • 结构非常相似的两个碱性氨基酸,在碱性条件下,基本完全重合在一起,没有分开的趋势,但是两个氨基酸的等电点相差很大,且氨基酸需要衍生化,不知道是哪个步骤出现问题,很是着急,望了解的人给予建议,谢谢!
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  • sunpengwjh

    第1楼2009/11/13

    等电点差很大,应该不是很难分离,知道等电点后关键是你选用的pH,您选用的pH是多少?

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  • i_am_ling

    第2楼2009/11/13

    是什么要求必须是碱性条件的?

    chen456(chen456) 发表:结构非常相似的两个碱性氨基酸,在碱性条件下,基本完全重合在一起,没有分开的趋势,但是两个氨基酸的等电点相差很大,且氨基酸需要衍生化,不知道是哪个步骤出现问题,很是着急,望了解的人给予建议,谢谢!

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  • chen456

    第3楼2009/11/13

    我选的是pH10.2的,有连个小山尖,但是在10.15和10.25时是一点也分不开了,又完全合在一起了,只是峰胖了点,矮了点,而且出峰时间也有改变,我目前不知道该怎么做下去了。谢谢您!

    sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:等电点差很大,应该不是很难分离,知道等电点后关键是你选用的pH,您选用的pH是多少?

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  • chen456

    第4楼2009/11/13

    我试了一下酸性条件,完全分不开,但是不知道是不是我的pH计当时有问题,还是选的缓冲体系不对,反正现在我很迷茫。按常理来说碱性氨基酸,在什么条件下能分开呢?

    i_am_ling(i_am_ling) 发表:是什么要求必须是碱性条件的?

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  • sunpengwjh

    第5楼2009/11/14

    酸性氨基酸:氨基数目少于羧基数目。溶液呈酸性,即PH<7。因此其与中性氨基酸相似,溶液中负离子数目要大于正离子的数目,要想达到等电点,就必须要降低负离子的数目,要向体系中加酸,加H离子。因此其:PI
    碱性氨基酸:氨基数目大于羧基数目。溶液呈碱性,PH>7。由于氨基的数目多,因此,溶液中正离子的数目比负离子的数目要多。要想达到等电点,则要减少正离子的数目,可通过加碱来实现。向溶液中加OH-,会消耗掉氨基所结合的H离子,从而使正离子数目降低。因此,碱性氨基酸的等电点与PH之间的关系为:PI>PH>7 。

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  • plf0717

    第6楼2009/11/20

    等电点相差很大的话,选择合适PH分离应该没啥问题的。

    建议选择PH介于两氨基酸等电点之间,这样高的带正电,低的带负电,
    不同电荷样品在CE中迁移速度不同。。。

    个人小见解,仅供参考!

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  • viernes

    第7楼2009/11/22

    正解
    我的理解也是
    在两个氨基酸的等电点 之间 取得pH
    一个带正电 一个带 负电吧

    sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:酸性氨基酸:氨基数目少于羧基数目。溶液呈酸性,即PH<7。因此其与中性氨基酸相似,溶液中负离子数目要大于正离子的数目,要想达到等电点,就必须要降低负离子的数目,要向体系中加酸,加H离子。因此其:PI
    碱性氨基酸:氨基数目大于羧基数目。溶液呈碱性,PH>7。由于氨基的数目多,因此,溶液中正离子的数目比负离子的数目要多。要想达到等电点,则要减少正离子的数目,可通过加碱来实现。向溶液中加OH-,会消耗掉氨基所结合的H离子,从而使正离子数目降低。因此,碱性氨基酸的等电点与PH之间的关系为:PI>PH>7 。

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  • chen456

    第8楼2009/11/23

    如果是三个呢?等电点基本相差一,八点几,九点几和十点几,怎么选pH呢?

    plf0717(plf0717) 发表:等电点相差很大的话,选择合适PH分离应该没啥问题的。

    建议选择PH介于两氨基酸等电点之间,这样高的带正电,低的带负电,
    不同电荷样品在CE中迁移速度不同。。。

    个人小见解,仅供参考!

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  • chen456

    第9楼2009/11/23

    说的很对,但是为什么分不开呢?这中间到底是什么原因呢?按说等电点不同,是能分开的,但是是条件很难摸索,我的时间有限,希望大家讨论一下,看看有没有更好的办法。

    viernes(viernes) 发表:正解
    我的理解也是
    在两个氨基酸的等电点 之间 取得pH
    一个带正电 一个带 负电吧

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  • cpudaxiao

    第10楼2009/11/23

    还有办法:1:提高分离电压。
    2: 提高缓冲液的浓度。
    3; 更换缓冲液种类,或加入环糊精之类的手性拆分试剂。

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