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【资料】细菌内毒素检测新手指南
houshiji
2009/11/16
私聊
生命科学仪器综合讨论
细菌内毒素检测新手指南
鲎试剂
鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物,经低温冷冻干燥而成的生物试剂,专用于细菌内毒素与β-葡聚糖检测。
鲎试剂按原料来源分:
全世界目前有4个种属的鲎,其中仅有东方鲎(Tachypleus tridentatus Leach) 和美洲鲎(Limulus polyphemus Linnaeus)可制造鲎试剂,对应生产出来的鲎试剂分别为东方鲎鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate, TAL)和美洲鲎鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate,LAL),TAL与LAL具有相同的功效。
鲎试剂按方法分:
凝胶法鲎试剂
动态浊度法鲎试剂
终点浊度法鲎试剂
动态显色法鲎试剂
终点显色法鲎试剂
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.5ml/支或者更大装量,使用时应加除热原水(细菌内毒素检查用水)复溶后使用。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单,经济,不需要专用测定设备,可以进行定性或半定量测定。
特异性鲎试剂,即弃G因子鲎试剂,是国内首创的产品, 它专一对内毒素起反应,避免了G因子旁路的干扰,使检测结果更加可靠,在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。
动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂,这四种方法都是定量检测内毒素的。
根据检测原理,终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间,或是检测浊度增加速度的方法。
终点显色法和动态显色法都是属于显色基质法。显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法,根据产物颜色判断内毒素浓度,又称为比色法。厦门鲎试剂厂于2005年推出以鲎四肽为显色底物的鲎试剂盒,抗干扰能力强, 灵敏度高达0.005EU/ml, 质量达到国际领先水平。目前已有500多家单位使用该试剂盒,并有部分单位发表相应文献。国内有少量国外产品,但价格远高于国产试剂,到货周期长。
如果您仅需要检测样品的内毒素限量,可以选择凝胶法鲎试剂,通过确定内毒素限值及最大有效稀释倍数,做样品的干扰试验从而确定使用的鲎试剂的灵敏度。
如果您需要定量测定样品中内毒素含量则应选择显色基质鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂。
动态浊度法与动态显色法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件,例如,微板鲎试仪ELx808及软件TALgent 或Gen5。动态浊度法与动态显色法简单方便、一步即成,线性范围宽。
终点显色法需要配套酶标仪或可见分光光度计进行检测。配套带有温育系统的酶标仪,如微板鲎试仪ELx808,可减少试剂用量。
相关链接:
厦门市鲎试剂实验厂有限公司于1983年成立,于2000年加资改组,是国内最大最早生产鲎试剂的厂家,本厂于1987年研制成功鼓浪屿牌鲎试剂(荣获1978-1979年度福建省重大科技成果二等奖,1983年卫生部甲级成果奖,1988年获卫生部科学技术进步三等奖),1988年获卫生部新试剂生产批件((88)卫药SJ-02号),1995年全国首家推出特异性鲎试剂,2005年又推出显色基质鲎试剂,2007年推出高效、自动、微量的鲎试仪ELX808(内毒素测定仪)及配套软件,2009年重磅推出透析专用鲎试剂盒。目前已有透析专用鲎试剂盒、显色基质鲎试剂、凝胶法鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、特异性鲎试剂、内毒素、辅剂及鲎试仪ELX808、除热源耗材等一系列产品。
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