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【求助】求助：液相色谱条件相关问题！

ttkl533

2009/12/22

液相色谱（LC）

我最近在做HPLC检测鱼体中的辛硫磷-一种有机磷农药，其实我建立检测方法的目的是为后面做辛硫磷在鱼体中的动态残留打基础的。我用的机子是 Waters的（具体型号没注意），自动进样，检测器是2996PDA的，可全波段扫描。标品购自国家标准开发中心，含量100ug/ml，溶解介质是石油醚。刚开始我是想用40%辛硫磷乳油来做的，结果做了很多次都不出峰。刚开始直接用纯甲醇溶解乳油，配置成各浓度的溶液，进样后出的峰很怪异，即使浓度很大检测器的响应值也很小，而且跟标品对比保留时间相差太远。后面用流动相稀释乳油，还是跟标品保留时间不一致。一直做了一两个星期问题依旧无法解决。后来查阅文献，发现做这种农药残留的大都用农药原药来做，原药的话一般纯度能达到90%以上，杂质的影响较小。没的说，买原药吧。还好比较顺利，三四天后原药就搞到手了，纯度为92%，液体。原药是中午拿到手的，下午立刻就去扫了紫外，扫出来的图跟标品几乎完全相同，当时那叫一个兴奋啊，恨不得立刻上 Warters试试看。但是我没有这条件，液相是整个学院公用的，一两个星期才能排到一次，一次也就10小时，没办法，等呗。好容易等到上机的那天，极度兴奋。因为还在摸条件，流动相是80%的甲醇，流速1，柱温当时也没设置，进样量20，柱子是国产的比较垃圾，凑合着还能使吧。先跑平基线，进标品，再进原药（原药是直接用甲醇溶解的），结果大失所望，标品5min出峰，原药8min出峰（最大峰），这这完全无法解释啊，本来是一种物质的差距怎么就这么大呢？再进标品，再进原药，色谱峰还是那样，真叫一郁闷啊。希望破灭，美梦落空。后来考虑到溶剂效应，直接用流动相稀释配置原药溶液，峰依旧没有改观。后面也试了其他配比的流动相，60%，50%都试过，柱温后来也设置为恒定的35°了，但是问题依旧存在，实在是束手无策了。

个人觉得可能的原因是：
1 标品或者原药有问题
2试验操作有问题。因为我接触液相也就几个月时间，连基本的理论、操作什么的都是一知半解，哪个小环节出了问题自己也不太清楚。
3仪器或者色谱条件的问题基本可以排除。文献上检测辛硫磷也是用的甲醇-水流动相，貌似效果都不错。
方法建立不了，后面的试验也就无从入手了，我进试验室都半年了，研二上学期转眼就过去了，还是毫无成就，没有拿得出手的数据，心里很着急，老板看我半年没东西肯定也看我不爽。各位大侠给小弟把把脉，诊断一下，看到底是哪里出了问题。

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jixf_1114

第1楼2009/12/22

比较两个峰的PDA数据有没有差异，然后做一个加标试验。同一个标准品或样品做重复性试验

0

caixia_123

第2楼2009/12/22

仅紫外相同的话不一定是一个东西吧

1

雾非雾

第3楼2009/12/22

应助达人

我们辛硫磷是用LCMS检测的，仪器的响应挺好，LC条件是参照日本官方一齐法LCMSMS的条件进行了小的微调。
您LC检测响应不好不知道是不是检测器的问题。

0

有水有渝

第4楼2009/12/22

应助达人

传个图上来，看了结构，在紫外下应该能很好检测，溶剂我觉得直接用甲醇也不是问题。就是不知道石油醚与甲醇是否互溶。

0

yankunsu

第5楼2009/12/23

辛硫磷见光易分解。我们的标样都用黑纸袋罩住，非常谨慎

0

冷冷的冰雨

第6楼2009/12/23

还可以在紫外条件下改变流动相，要是还一致就说明是一个东西

0

xingyun007

第7楼2009/12/24

辛硫磷见光易分解

0

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