土老冒豆豆
第1楼2010/01/14
广金钱草(Desmodium styracifolium (Osbeck)Merr.)是豆科山蚂蝗属植物,是我国常用的传统中药,具有清热、利尿、排石的功能,用于泌尿系统感染、泌尿系统结石、胆石症、急性黄疸型肝炎等[1],含黄酮类,生物碱类,皂苷类,酚类等成分。药理研究证明:广金钱草中的三萜皂苷类和黄酮苷类化合物有预防乙二醇和维生素D 造成的大鼠草酸钙尿路结石形成的效果,广金钱草总黄酮对心脑血管病理模型具有很好的改善作用。《中国药典》对其含量测定尚无收载,本研究采用紫外分光光度法对广金钱草中总黄酮的含量进行了测定,旨在为广金钱草药材及制剂的质量控制提供科学依据.
1仪器与试药
AA-200电子天平(美国丹法),DGB/20-002台式干燥箱(重庆试验设备厂),KQ-100E超声波清洗器(江苏昆山),UV-2501PC紫外可见分光光度计(日本岛津)。
广金钱草全草分别购于**、**、**,经**所鉴定为正品广金钱草,芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所(批号0080-9705),试剂均为AR级。
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第2楼2010/01/14
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取在120℃下干燥至恒重的芦丁标准品22.13mg,置于50mL容量瓶中,加入60%乙醇适量,置水浴上微热溶解,放冷,以60%乙醇稀释至刻度,摇匀。精密量取25ml,置50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。
2.2 供试品溶液的制备 精密称取广金钱草4g,加60%乙醇70ml回流3小时,放冷,滤过,残渣加60%乙醇20ml超声30分钟,滤过,合并滤液,置100ml量瓶中,滤渣用60%乙醇洗涤,洗液置同一量瓶中,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀。精密量取25ml,置50ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。
2.3 测定波长的选择 精密量取对照品溶液3ml,置25ml量瓶中,加30%乙醇至6.0ml,加5%亚硝酸钠溶液1ml,摇匀,放置6分钟,再加10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟。加氢氧化钠试液10ml,再加30%乙醇至刻度,摇匀,放置15分钟,以相应试剂为空白,测定吸收光谱,在509nm处有最大吸收。
2.4 标准曲线的绘制 精确量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分置于25mL容量瓶中,各加30%乙醇至6.0ml,按2.3项下,自“加5%亚硝酸钠溶液1ml”起依法操作,在509nm波长处测定吸光度,以浓度(C)为纵坐标,吸光度(A)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程:C = 8.8471E-05 A -1.7453E-07 ,r =0.999 9(n=7),结果表明,芦丁浓度在4.4μg/ ml~53.1μg/ ml范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验 精密量取对照品溶液3ml,按2.3项下方法操作,于509nm波长处测定吸光度5次.结果显示平均吸光度为0.398,RSD为0.45%。
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第3楼2010/01/14
2.6 稳定性试验 精密量取供试品溶液3ml,按2.3项下方法操作,于0、10、30、45、60、90min时测定吸光度.结果表明,芦丁与铝离子形成的红色络合物在45min内稳定,RSD为1.21%。
2.7 重现性试验 精密称取药材样品4.0 g,共5份,按2.2项下方法制备供试品溶液,按2.3项下方法操作,于509nm波长处测定吸光度,按回归方程计算,测得其总黄酮含量为1.21%,RSD为0.9%。
2.8 加样回收率实验 取已知总黄酮含量(1.21%)的样品各6份,每份精密称取2g,按2.2项下方法制备供试品溶液。精密量取供试品溶液3ml,置25mL容量瓶中,精密加入对照品溶液1.5mL,加30%乙醇至6.0ml,按2.3项下,自“加亚硝酸钠溶液1ml”起依法操作,按回归方程进行计算,结果见表1。
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第5楼2010/01/14
3 讨论
3.1 提取溶剂的考察 比较了甲醇、三氯甲烷、60%乙醇[2]三种溶剂的提取效果,以60%乙醇回流提取时的总黄酮含量高于其他溶剂提取,故选用60%乙醇为提取溶剂。
3.2 提取方法的考察 比较了超声、回流、索式提取三种方法,以回流3个小时后,超声0.5h提取所得总黄酮含量较高,故选用该法提取。
3.3 测定方法的选择 以芦丁为对照品,以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂,利用紫外分光光度计对广金钱草中总黄酮的含量进行测定的方法,具有简便易行及结果稳定可靠等优点。故选用该法测定。
参考文献
[1]赵学敏.本草纲目拾遗.第2版,北京:人民卫生出版社,1983:86.
[2]杨美华、卢兖伟、匡岩巍等.高效液相色谱法测定广金钱草中vicenin-2的含量.药物分析杂志,2004,24(1):95-97.