【讨论】怎么解决色谱柱灵敏度差的问题

一个是色谱柱再生，另一个就是选择适合的样品

灵敏度差，一般不是色谱柱本身的问题，是色谱柱选择的问题。对样品量小的分析，要提高分析的灵敏度，需选择内径小的色谱柱。月旭公司除了有常规4.6mm内经色谱柱外，另外还提供4.0、3.9、3.0、2.1和1.0mm内径的色谱柱。

应助达人

提高柱温能不能提高灵敏度？

没有听过这样的说法，提高柱温能加快样品出峰，缩短保留时间，但是太高的柱温，对色谱柱也是一种损害

哈哈。。。有道理，正是因为出峰变快，峰会变高灵敏度也会变高，所以提高柱温我认为对提高灵敏度有一定作用的，但作用有限。比较好的方式还是像plexu版主所提议的，用内径更小的柱子。

除非色谱柱柱效下降，否则灵敏度跟色谱柱无关。
为提高灵敏度，可在选柱上作如下改进：
1.选择细粒径的短柱，也就是由HPLC跳跃到UPLC；此时不论用何种检测器，灵敏度均提高；
2.填料和柱长不变，选择细内径的色谱柱，此时只有检测器为浓度型检测器时才有效，比如紫外-可见、荧光检测器等，对于质量型检测器基本无效（当然体积流速降低，质谱检测器的离子化效率升高，响应值也会略有增大，但涉及因素太多，不再深入讨论）；选用细内径的柱子时，应恒定流动相线速度，这样出峰时间、区域宽度柱性能均不改变，但流动相对组分的稀释情况下降，所以峰高会升高；举个例子，如果你从4.0 mm内径变为2.0mm内径，体积流速应变为原流速的1/4,响应值提高为原来的4倍，其余均不改变。另使用细径柱时，常常需要改进系统，减少柱外效应，否则可能会引起柱外展宽，使分离度下降。
其中2是对Plexu的补充。

应助达人

由HPLC跳跃到UPLC，而进样量也减少了。光从进样量来说，灵敏度也下降了，对吗？

HPLC向UPLC跨越只涉及到了填料粒径的变化，最大载样量不会降低；
最大载样量会与内径的平方成反比，柱内径下降，最大载样量会下降，注意，是最大载样量。您一直担心灵敏度问题，所以我猜测您的样品浓度肯定较低，所以即使您使用了细径柱，样品也不会过载。我的经验，只要样品浓度不是太高，2.1 mm的细径柱即使进样20 微升，也不会过载。
提醒两点：
1.样品用流动相溶解；‘
2.使用细径柱时最好能换个小流通池(比如5微升)，连接管路也换成内径较细的，长度要短。

学习了！个人感觉也与色谱柱无关！