【讨论】牛乳中β-内酰胺酶检测方法——高效液相色谱法

应助达人

2、直接法

方法原理：
　　牛乳中的青霉素钾在β-内酰胺酶的作用下，主要生成青霉噻唑酸钾，并伴随生成少量的青霉胺、青霉醛等物质。经去脂肪、蛋白等前处理后，可以将青霉噻唑酸钾提取出来，经高效液相色谱仪检测确认其是否存在，从而判定该牛乳是否为人造“无抗奶”。

实验步骤：
　　称取20 g试样，在4 ℃、16000 rpm条件下离心10 min。取下层清液10 g于50 mL塑料离心管，加入无水乙醇15 mL，振荡提取30 min后离心，取清液经0.45 μm的滤膜过滤，用高效液相色谱仪检测。
标准溶液配制：称取0.01 g（精确至0.001 g）青霉素钾于100 ml容量瓶中，加入1ml市售抗生素分解剂，室温放置2h使青霉素钾酶解完全后用去离子水定容，得到青霉噻唑酸钾标准溶液，浓度100 μg/mL。根据实际情况稀释后使用。

色谱条件：色谱柱 Agilent Zorbax SB C18，4.6mm×150mm×5μm；
流动相 甲醇/0.004 M磷酸二氢钾（pH=4.5）＝40/60；
检测波长 230 nm

讨论：
　　该方法通过检测酶解产物青霉噻唑酸，只能给出定性结论即牛奶中是否含有β-内酰胺酶，而无法给出确切定量结果即牛奶中含有β-内酰胺酶的量（U/ml）；青霉噻唑酸钾稳定性尚需进一步考；实验成本较生物学方法高。

快乐：你这些资料的来源是哪里啊！

应助达人

只是同行给的资料，还没有对其进行验证

谢谢了，呵呵。

应助达人

我也奇怪，大家都有液相，为什么都用杯蝶法来测呢？

现在还没有这方面的标准吧

应助达人

卫生部公布应该是杯蝶法。

好方法 谢谢 开展一下...