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【原创】高乌甲素的测定

zxhcnf

2010/03/02

高乌甲素的测定

一．样品分子结构

中文名
英文名
分子结构
溴化氢高乌甲素
Lappaconitin hydrobromide

二. 样品来源记录

样品商品名：

样品测定描述：主成分含量测定

生产厂家：

三. 液相方法条件

方法来源：根据客户提供方法改进；

具体方法：

色谱柱：Ultimate® XB－C18，5um，4.6×250mm，Ult091019P13；波长：252 nm；

流动相：甲醇：50mM磷酸二氢钠溶液＝75：25（混合后的pH用三乙胺调节至8.40，剂量为甲醇150ml和50mM磷酸二氢钠溶液50ml，混合后加入三乙胺约1.5滴）；

温度：室温 15度；

流速：1.0 ml/min；

进样量： 20 ul；

流动相的配制：

准确称取磷酸二氢钠50mmol，溶于1000ml水中，搅拌均匀；准确量取甲醇300ml与配制好的50mmol/L的磷酸二氢钠溶液100ml混合，搅拌均匀，超声脱气，冷却至室温；再往该混合溶液中加入75ul三乙胺；

样品处理方法：

用流动相溶解样品（浓度未知，是客户配制，然后我们用流动相稀释至原来浓度的1/4倍）；

注意事项：

1. 与客户提供方法的唯一区别：

1）往流动相中加入磷酸二氢钠做缓冲盐，得到浓度为50mmol/L的磷酸二氢钠溶液；

2）往混合好的流动相中适当的加入了75ul的三乙胺；

2. 用流动相溶解样品；

3. 色谱柱的维护：

1）一天分析开始前，先用甲醇：水＝20：80以1ml/min冲洗色谱柱30min，然后用流动相走基线，基线平稳后进样；注意：由于流动相中磷酸二氢铵的浓度比较大（浓度为100mmol/L）基线比较难平衡，可能需要45～60min；

2）一天分析完成后，先用甲醇：水＝20：80以1ml/min反向冲洗色谱柱40min，再用甲醇：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min；

4. 缓冲溶液，隔天需重新配制。

四. 谱图及数据

1. 样品第一针：12.80min处的峰为高乌甲素峰

2. 第二针重现性测试：

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huaibeijiayuan

第1楼2010/03/02

好像谱图没看到，想请问一下：经常反冲色谱柱，对色谱柱会不会有伤害。

0

zxhcnf

第2楼2010/03/03

不会的，之前好像讨论过这个问题，是关于正向使用反向冲洗这种维护方式优劣的。
huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:好像谱图没看到，想请问一下：经常反冲色谱柱，对色谱柱会不会有伤害。

0

可爱宝贝

第3楼2010/03/03

保留时间是不是比较推迟，有没有用乙腈试过呢

0

1234chen

第4楼2010/03/04

12分钟长吗？我测的东西一般都要30~50min才走完。第一针基线有点漂。

0

雪妖

第5楼2010/03/04

有缓冲盐，平衡时是要久点

0

东风恶

第6楼2010/03/11

建议没有特殊说明的色谱柱不要反冲啊！因为这样对柱床有很大影响。
huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:好像谱图没看到，想请问一下：经常反冲色谱柱，对色谱柱会不会有伤害。

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东风恶

第7楼2010/03/11

从谱图上看是平衡的很好，主要是色谱柱进样时（第一针）波动较大。这个主要是机子的问题。
雪妖(czj_1027) 发表:有缓冲盐，平衡时是要久点

0

雪妖

第8楼2010/03/11

这个是这样的，好像是说装填的时候有进出的
东风恶(luoleqc) 发表:建议没有特殊说明的色谱柱不要反冲啊！因为这样对柱床有很大影响。

0

1234chen

第9楼2010/03/17

不过月旭的柱子好象自称是可以反冲的没问题的。

0

毛毛儿

第10楼2010/04/08

应助工程师

我基本上不反冲柱子，万不得已才反冲！

0

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