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【求助】顺乌头酸酶紫外吸收

jinzhao945

2010/03/31

紫外可见分光光度计（UV）

大家好，我的实验过程中遇到了些问题希望能得到大家的帮助，谢谢啊！
为了测定实验动物小鼠的肝肾中的顺乌头酸酶，我用提取液匀浆，提取液成分（50mM Tris-HCl,1mM半胱氨酸，1mM柠檬酸钠，0.5mM MnCl2 ,PH8.0 ），离心后上清液与测定液（50mM Tris-HCl，20mM柠檬酸钠，PH8.0）反应，测紫外吸收，文献报道是240nm会有最大吸收，但是我的实验结果是在230nm有吸收峰，所以怀疑此230nm吸收峰是不是就是我要测的吸收峰，然后用排除法，因为测定液中的柠檬酸钠是酶反应的底物，当测定液中不加人底物，如果没有发现吸收峰的话那此吸收峰可能就是我要测的顺乌头酸酶跟底物柠檬酸钠反应产生的顺乌头酸的吸收，但是，紫外200-300nm扫描发现在200-235nm间有馒头状高吸收，是有底物条件下吸收峰的3倍甚至更高，这是为什么呢？
为什么我加入底物之后使紫外吸收显示出一个吸收峰，整体的吸光度下降那么多呢？

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初学者&九点虎

第1楼2010/04/11

感觉第二个图把目标吸收峰叠加了

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初学者&九点虎

第2楼2010/04/11

楼主如何控制溶液中PH的，这一点对酶学试验很重要

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