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【求助】离子交换蛋白洗脱不下来？

液相色谱（LC）

  • 采用Agilent的zobrax SAX （强阴离子柱）4.6*150。蛋白样品：BSA 分子量约60kDa，pI=4.8。上样浓度1mg/ml，进样50ul，流速：0.8ml/min，280nm紫外检测。

    流动相 A 20mM，pH7磷酸钠buffer，B：A+1M NaCl。

    程序
    0～15min：100％A；
    15～45min：梯度B至100％；
    45～50min：100％B

    没有蛋白样品峰

    我尝试过pH6.5，6.0的buffer，也尝试过pH8.0的Tris－HClbuffer，B的洗脱盐尝试过1M硫酸铵。以上条件均无法洗脱出蛋白峰。

    直接0.5M NaOH再生柱子可以从柱子上洗脱出峰。

    离子交换一般用NaCl或者硫酸铵即可。很奇怪，BSA上样后没有洗脱峰，不知诸位版友有和建议？
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    +关注 私聊

  • 初晶古恒

    第1楼2010/04/19

    你这属于“卤水点豆腐”了。。。。

0
    +关注 私聊

  • It is me!

    第2楼2010/04/21

    是不是柱子不合适???

    初晶古恒(zrtt) 发表:你这属于“卤水点豆腐”了。。。。

0
    +关注 私聊

  • 初晶古恒

    第3楼2010/04/28

    不是柱子不合适,是你的流动相不对.盐分过高会导致蛋白质凝聚,就跟做豆腐的原理一样了.

    你去查查合适的流动相吧.

0
    +关注 私聊

  • Ins_8c66c4e4

    第4楼2024/04/29

    我也遇到了同样的问题，最后您是怎么解决的？

0
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