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【转帖】关于如何提高作RTPCR前RNA提纯的纯度的一个小技巧

  • gotobio111
    2010/04/21
    • 私聊

PCR

  • 偶在实验室里发现欧的实验室提纯出来的RNA的A260/A280的值总在1.5左右。我发现我们实验室的离心速度叫Protocol中往往偏高，时间偏长。经过多方尝试，我发现问题主要出在用异丙醇沉淀这一步的离心速度过高，时间过长。虽然理论上说这样做可以提高产量，但却大大降低了纯度。虽然多数书上写这步主要是将RNA与小分子物质分离，但似乎混杂的蛋白质也可以被沉淀下来，而且沉淀能力较RNA似乎要弱一些。因此，降低了离心速度和时间，RNA的A260/A280基本在1.7左右。这里提醒各位园友，不要以为离心速度越快时间越长效果越好。

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    +关注 私聊

  • tianru的爸爸

    第1楼2010/05/12

    也许是因为RNA比干扰物质-Pr的沉降系数大，所以在用高速度时，干扰反而会增加。

0
    +关注 私聊

  • 高卧东山

    第2楼2010/05/28

    去蛋白质干扰主要靠在分层那一步不要贪多吧

0
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