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【讨论】同一样品不同仪器测试结果相差20nm?

分子荧光光谱

  • 同一样品在不同仪器上测试其发射光谱,相同激发光,发射光谱相差20nm,怎么回事?
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  • 初学者&九点虎

    第1楼2010/04/28

    这个差别也太大了吧

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  • jidzhang

    第2楼2010/04/29

    肯定是一个仪器有问题,建议拿标样看看是哪个出了问题。

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  • pfz1985

    第3楼2010/04/29

    仪器肯定有问题,建议调试下,最好是用一种仪器检测

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  • jixf_1114

    第4楼2010/04/29

    这个是有可能的,即使是同一厂家的两台仪器,一台经过响应校正,一台没有,得到的结果是没有可比性的。主要是激发光在不同波长下能量不一致,PMT对不同波长的响应不一致,光路中光栅及各反光镜对不同波长的反射率不一致,造成仪器不同波长的响应不一致。只有在经过响应校正后得到的数据才是样品的真实数据,这个数据才可以与其他型号厂家的仪器结果比较,但前提是其他仪器也经过相同的校正

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  • jcshao

    第5楼2010/04/30

    谢谢大家的回复,但还有个问题,另外一种样品在这两个仪器上测试,出了分辨率不同外,主峰都相近。

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  • fragr

    第7楼2010/04/30

    如果在红光区,差别会很大有可能,紫外可见区差别应该小一些。

    建议:
    1、两台仪器是否能确认波长准确性?
    2、是否都有了校正文件?
    3、请排除其他的干扰峰。

    jcshao(jcshao) 发表:谢谢大家的回复,但还有个问题,另外一种样品在这两个仪器上测试,出了分辨率不同外,主峰都相近。

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  • jcshao

    第8楼2010/05/01

    [quote]原文由 fragr(fragr) 发表:如果在红光区,差别会很大有可能,紫外可见区差别应该小一些。

    这是为什么?

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  • hwzhou10

    第9楼2010/05/03

    你的样品是什么? 是不是有光变化呢?

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  • prime

    第10楼2010/05/04

    发射光谱相差20nm是指2台仪器的发射峰扫描有 20nm位移吗?
    你可以先排除样品的变化,在两台仪器上多次反复扫描样品,看扫描图谱是否一致,如有条件也可再配一次样品看看。

    在确定样品没有问题后,再讨论仪器是否正常,有个比较简单的测试方法,我们可以作水的拉曼散射实验,激发波长调至365nm扫描,在发射波长414nm可以得到拉曼散射,如果2台仪器的结果都在414nm附近,可以认为波长基本没大问题。否则可能要仪器工厂检修了。
    你的这个实验,对于未做过仪器能量归一化的荧光分光光度计,确实可能有一定波长位移 ,尤其是对于发射光谱宽的样品。
    荧光发射光谱一般都很宽,有几十甚至上百纳米,如果你的样品扫描峰很宽,峰值位置不很明显(比如在荧光峰附近30-50nm范围,荧光值都差不多大)。不同仪器能量不一致就显得很突出。
    在红光区影响更大的原因是,荧光分光光度计的光电检测器采用光电倍增管(PMT)为多,光电倍僧管在红外的衰减非常大,器件在此区域的一致性较差。所以,在红光区(一般在650以后)仪器若不做归一化,一致性确实会比较差。其实,对于分光光度计,在波长的两端,一致性都是会差点的

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