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【转帖】HPLC分析方法开发中流动相调整。

东风恶

2010/05/15

方法 1：由强到弱：一般先用 90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)
进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整
有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
方法 2 三倍规则：每减少 10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留
因子约增加 3 倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调
整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
方法 3 粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂 10%的改
变量调整为 5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情
况不再改变。
先 100%的有机溶剂，在降下来。因为有些分离 96%即可分离
http://www.westyx.com/bbs/read.php?tid=60504&fpage=13

分
该帖子已被版主-月旭科技--小S加10积分，加2经验;加分理由:感谢分享啊!

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快乐

第1楼2010/05/15

应助达人

以前知道由强到弱，但不知道三倍规则，谢谢东风。

0

chqiu111111

第2楼2010/05/15

恩，不错，学习了，谢谢哈！看来就是高手啊！

0

lxx5052

第3楼2010/05/17

看来以前没有遵循这个方法，能分离好就行，呵呵，这下知道规则了，非常感谢楼主！

0

快乐

第4楼2010/05/17

应助达人

我用UPLC时，感觉只有楼主所说的一半。

0

yongw

第5楼2010/05/18

东风讲的用到了3倍规则
但是应用更多的是刚开始时走个梯度，根据梯度结果计算等度条件

0

yongw

第6楼2010/05/18

楼主应该讲的都是反相条件吧

0

yongw

第7楼2010/05/18

没有过UPLC，问问快乐：UPLC一般分析样品基本上都是在10分钟以内出峰吗？流速都是低流速吗？柱子有多长？液相都是两元泵吗？
快乐(ynsfeed) 发表:我用UPLC时，感觉只有楼主所说的一半。

0

快乐

第8楼2010/05/18

应助达人

是指刚开始摸条件时，都是利用梯度，最后才等度，是吗？
yongw(yongw) 发表:东风讲的用到了3倍规则
但是应用更多的是刚开始时走个梯度，根据梯度结果计算等度条件

0

快乐

第9楼2010/05/18

应助达人

基本上3min全出完了。
yongw(yongw) 发表:没有过UPLC，问问快乐：UPLC一般分析样品基本上都是在10分钟以内出峰吗？流速都是低流速吗？柱子有多长？液相都是两元泵吗？

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yongw

第10楼2010/05/18

对，就是这个思路
走一针梯度，等度就知道给大概，然后再确定具体的等度比例
快乐(ynsfeed) 发表:是指刚开始摸条件时，都是利用梯度，最后才等度，是吗？

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