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【原创】【极限体验】月旭XB-C18色谱柱对复方石韦胶囊中苦参碱含量检测

雪妖

2010/05/18

有段时间没有来了，月旭版越来越红火，客套话不说，直接上正文。

于2006年给一家药厂制定的改剂型类新药申报资料，我主要负责含量测定的标准制定，现在主要说的是色谱条件摸索的一些小结，说不上经验，因为时间较久，就没有色谱图，就看看文字，希望对大家有帮助。

复方石韦胶囊
[主要成份]：石韦、黄芪、苦参、扁蓄。
[功能主治]：清热燥湿，利尿通淋。用于小便不利，尿频，尿急，尿痛，下肢浮肿等症；也可用于急慢性肾小球肾炎，肾盂肾炎，膀胱炎，尿道炎，见有上述证状者。

检测成分：苦参碱
分析仪器：岛津高效液相色谱仪
紫外检测器
手动进样阀

一、检测波长确定：
配置苦参碱的标准溶液，浓度为5.0μg/ml，于紫外分光光度计中进行波长扫描，确定最大吸收波长；
根据波长扫描结果和参照相关方法，确定检测波长为：220nm

二、色谱条件建立：
1、色谱柱：大连某家ODS C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
流动相：甲醇：水：三乙胺（50：50：0.2）
柱温：40℃
流速：1.0ml/min
检测波长：220nm
色谱图：
S-001：保留时间 11.000min 峰形较差，呈馒头样
Y-001：保留时间 11.005min 与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

2、色谱柱：大连某家ODS C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
流动相：乙腈：磷酸水溶液（PH：2.0）：无水乙醇（80 ：10 ：8）
柱温：40℃
流速：1.0ml/min
检测波长：220nm
色谱图：
S-002：保留时间 15.093min 峰形较差，保留时间较长
Y-002：保留时间 15.102min 与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

由于峰形较差，理论板数较低，更换色谱柱。（换下的色谱柱，用另一台LC进行冲洗）

3、色谱柱：上海某家 C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
流动相：乙腈：磷酸水溶液（PH：2.0）：无水乙醇（80 ：10 ：8）
柱温：40℃
流速：1.0ml/min
检测波长：220nm
色谱图：
S-003：保留时间 19.537min 峰形较差，保留时间较长
Y-003：保留时间 19.601min 与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

由于峰形较差，理论板数较低，更换色谱柱。（换下的色谱柱，用另一台LC进行冲洗）

4、色谱柱：月旭XB C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
流动相：乙腈：磷酸水溶液（PH：2.0）：无水乙醇（80 ：10 ：8）
柱温：40℃
流速：1.0ml/min
检测波长：220nm
色谱图：
S-004：保留时间 16.024min 峰形较好，保留时间较长
Y-004：保留时间 16.099min 与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

5、色谱柱：月旭XB C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
流动相：甲醇：水：三乙胺（50：50：0.2）
柱温：40℃
流速：1.0ml/min
检测波长：220nm
色谱图：
S-005：保留时间 11.398min 峰形好
Y-005：保留时间 11.297min 与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

6、色谱柱：月旭XB C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
流动相：甲醇：水：三乙胺（50：70：0.2）
柱温：40℃
流速：1.0ml/min
检测波长：220nm
色谱图：
S-006：保留时间 13.110min 峰形好
Y-006：保留时间 13.082min 与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

在以上实验中，确定了色谱柱和检测波长，柱温，流速，苦参碱的出峰时间和顺序，为了节约时间，在以下的色谱条件选择中考察是否能样品中杂质峰分离

7、流动相：甲醇：水：三乙胺（50：71：0.2）
色谱图：
Y-007：保留时间 13.570min 与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

8、流动相：甲醇：水：三乙胺（50：75：0.2）
色谱图：
Y-008：保留时间 13.390min 与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

9、流动相：甲醇：水：三乙胺（80：75：0.2）
色谱图：
Y-008：保留时间 8.800min 与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

10、流动相：甲醇：水：三乙胺（80：100：0.2）
色谱图：
Y-008：保留时间 25.950min 与目标峰的前一个杂质峰完全重合，更改色谱条件

11、流动相：甲醇：水：三乙胺（60：40：0.2）
色谱图：
Y-009：保留时间 8.920min 与目标峰分开，分离度1.95

复方石韦胶囊中苦参碱含量检测色谱条件：

分析仪器：高效液相色谱仪
紫外检测器
色谱条件：
色谱柱：月旭XB C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
流动相：甲醇：水：三乙胺（60：40：0.2）
柱温：40℃
流速：1.0ml/min
检测波长：220nm

小结：
1、苦参碱为碱性物质，故在流动相中加入三乙胺作为碱性调节剂，但是该种物质和水溶解度较小，在配置流动相时要尽量的混匀；
2、在该样品中，由于苦参碱和前一个杂峰对流动相的敏感度想接近，在做流动相调节时，相互成分之间的比例作较大调整，如果调整较小，两个峰同时向前或向后移动，故没有明显的分离效果。

因为没有色谱图，没有办法做很直观的比较，请大家耐心的看，多提宝贵意见。

精
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yongw

第1楼2010/05/18

谢谢楼主分享

0

雪妖

第2楼2010/05/18

希望对你有帮助，是一个选择色谱条件的一个方向
yongw(yongw) 发表:谢谢楼主分享

0

精
该帖子已被管理者-设置为精华，下面是奖励记录：加20积分,加5声望

lxx5052

第3楼2010/05/18

挺详细的哦

0

快乐

第4楼2010/05/18

应助达人

三乙胺对色谱柱的损伤是不易逆转的。

0

快乐

第5楼2010/05/18

应助达人

确定了波长、柱温、流速外，又调了4次流动相，才得到好的谱图，真是有耐心，值得学习。

0

zxhcnf

第6楼2010/05/18

雪妖的作品真是能让人学到不少东西，直接就是一篇方法开发的教材啊

0

雪妖

第7楼2010/05/18

谢谢夸奖

色谱条件选择的时候就是要很细心的，可惜是没有色谱图了，用月旭的色谱柱很久，做的东西也多，再找找有什么可以和大家分享的
请大家多多指教
zxhcnf(zxhcnf) 发表:雪妖的作品真是能让人学到不少东西，直接就是一篇方法开发的教材啊

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雪妖

第8楼2010/05/18

这个不是吧
我认为是没有的
我们06年做了，然后厂家拿到了试生产的资格
那就要做两年，就是用的月旭的这款色谱柱
现在都没有什么问题，这也是他们较重要的产品，经常检测的
因为我的一个师妹在那边，所有了解比较清楚的
快乐(ynsfeed) 发表:三乙胺对色谱柱的损伤是不易逆转的。

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lxx5052

第9楼2010/05/19

是该向雪妖多多学习哦，呵呵
zxhcnf(zxhcnf) 发表:雪妖的作品真是能让人学到不少东西，直接就是一篇方法开发的教材啊

0

雪妖

第10楼2010/05/19

哈哈，不敢当呢
lxx5052(lxx5052) 发表:是该向雪妖多多学习哦，呵呵

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