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【求助】Beckman P/ACE MDQ如何实现单细胞进样及缓冲液问题

  • katherine7
    2010/05/20
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 我是毛细管电泳仪方面的新手,将做单细胞分析方面的工作,期盼高手指教。我们这边的是Beckman P/ACE MDQ毛细管电泳仪。
    但是,我始终弄不清该如何进样比较好,不知是否有高手做过这方面的工作,希望您能给我一些宝贵的建议。
    问题 1. 如何实现单细胞进样(之前试过,用PBS重悬细胞后,进行进样,电流很高,且未出峰)
    2. 缓冲液用哪种比较好
    3. 如果提细胞总DNA后再进样,缓冲液之类的问题该如何解决
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  • sunpengwjh

    第1楼2010/05/21

    建议试试压力进样,看看效果怎么样!不知道楼主做过没做过!

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  • lisa_a

    第2楼2010/05/21

    我的仪器和你的是一样的,我们也将要做单细胞分析,进样确实个问题,不过我们联系了工程师,要配置一个进样的东西,也就是把现在进样的那一部分引到电泳仪外边,然后配置一台显微镜,这样可以在显微操作下进行单细胞进样。缓冲液的类型我们正在筛选中,以后跟楼主再交流,提细胞总DNA后,先跑胶看是不是呈现梯状条带,然后进行电泳分析,缓冲液最好根据你DNA的背景液进行筛选,祝你好运~

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  • katherine7

    第3楼2010/05/22

    谢谢楼上的回复哦
    试过压力进样了,但是效果还是不行。
    将细胞浓度稀释到很低,是否可以类似于单细胞看呢?
    现在光是缓冲液的问题,都头大咯

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  • baiyunshan

    第4楼2010/06/01

    请问一下你们检测细胞,用的检测器是激光诱导荧光装置还是其他的检测器?

    lisa_a(lisa_a) 发表:我的仪器和你的是一样的,我们也将要做单细胞分析,进样确实个问题,不过我们联系了工程师,要配置一个进样的东西,也就是把现在进样的那一部分引到电泳仪外边,然后配置一台显微镜,这样可以在显微操作下进行单细胞进样。缓冲液的类型我们正在筛选中,以后跟楼主再交流,提细胞总DNA后,先跑胶看是不是呈现梯状条带,然后进行电泳分析,缓冲液最好根据你DNA的背景液进行筛选,祝你好运~

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  • lzldnn

    第5楼2010/06/01

    猜测楼主所感兴趣的是DNA,莫非是用紫外或者DAD检测器?据我所知,P/ACE 所配的三种检测器里面只有LIF可以满足单细胞分析的检测限要求。在目前见诸文献报道的单细胞电泳分析中,多以实验室自制的改装仪器为多,常见的检测器为激光诱导荧光检测器,纳米电极电化学检测器,还有化学发光检测器。建议楼主多给些信息,单细胞毛细管电泳分析,可以参考一下化学所陈义研究员的书籍资料,还有武汉大学程介克老师的《单细胞分析》一书

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  • katherine7

    第6楼2010/12/26

    sorry哦,才回复你。之前是UV

    baiyunshan(baiyunshan) 发表:请问一下你们检测细胞,用的检测器是激光诱导荧光装置还是其他的检测器?

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  • katherine7

    第7楼2010/12/26

    谢谢你的信息,你推荐的这两本书,在看中。用的是激光诱导荧光检测器,不过我们这边没有改装。因为一些原因,现在在做CE核酸分离,没做单细胞分析了。期待继续交流哦!Thank you!

    lzldnn(lzldnn) 发表:猜测楼主所感兴趣的是DNA,莫非是用紫外或者DAD检测器?据我所知,P/ACE 所配的三种检测器里面只有LIF可以满足单细胞分析的检测限要求。在目前见诸文献报道的单细胞电泳分析中,多以实验室自制的改装仪器为多,常见的检测器为激光诱导荧光检测器,纳米电极电化学检测器,还有化学发光检测器。建议楼主多给些信息,单细胞毛细管电泳分析,可以参考一下化学所陈义研究员的书籍资料,还有武汉大学程介克老师的《单细胞分析》一书

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