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cIEF检测单抗,各峰相对丰度不稳定

毛细管电泳(CE)

  • 最近在做一个中性单抗的cIEF方法,用的是贝克曼PA800plus。在对标准品进行分析的时候发现,不同时间检测的结果,各峰的相对丰度会有变化,最高峰有时候是第二个,有时候是第四个。样品、仪器、人员、缓冲体系等条件都是一样的。各峰的pI值也很稳定。这种情况是正常的吗,这样的结果很不利于对各峰制定标准,不知道大家都是怎么做的?
    我采用的方法和体系基本都与贝克曼提供的一致,尿素浓度采用6M,聚焦时间是12.5min.对聚焦时间进行过优化,分别考察了10min,12.5min,15min,17.5min和20min,除了10min分离度不好外,其他结果图谱基本一致,考虑到节省时间选了12.5min。最近对结果进行分析的时候,发现各时间的电流图有点差异。聚焦结束时,17.5min电流降到最低大概1.5uA,15min 大概1.6uA,而12.5min大概1.7,1.8uA这样。
    是不是我选择的聚焦时间不够导致了相对丰度会有变化?如何判断聚焦时间,是电流降到最低表示聚焦充分吗?
    急等大神回答
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  • nini2006

    第1楼2016/01/16

    1、标准品有没可能发生降解?
    2、是否有分子量、性质都很接近的蛋白质?因为这样的蛋白质本来分得就不是很开,条件稍微有变化的时候就显示出数量不同的峰。
    3、分离得到的峰个数不同,相对丰度当然会有变化。
    4、理论上,应该是聚焦结束的时候电流最小

    没做过,纸上谈兵,仅供参考

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  • lingyou

    第2楼2016/01/18

    1.标准品是冻存的,每次新取,降解不太可能
    2.标准品比较纯,同时没有做其他物质,应该不可能有干扰
    3.峰的个数没有变化,只是峰的高度有差异
    4.工程师说理论上聚焦没有结束,谱图合适就行
    所以不知道这种现象产生的原因

    nini2006(nini2006) 发表:1、标准品有没可能发生降解?
    2、是否有分子量、性质都很接近的蛋白质?因为这样的蛋白质本来分得就不是很开,条件稍微有变化的时候就显示出数量不同的峰。
    3、分离得到的峰个数不同,相对丰度当然会有变化。
    4、理论上,应该是聚焦结束的时候电流最小

    没做过,纸上谈兵,仅供参考

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  • CEcret

    第3楼2016/01/19

    聚焦时间不同,当然会导致聚焦的峰形及分布不同.此外,也会影响聚焦结果的稳定性.所以很多因素是需要优化的哦

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  • lingyou

    第4楼2016/01/19

    是的!所以想交流一下,看看大家有没有遇到过类似的问题,有没有什么思路。一个人思考简直是瞎子摸象

    CEcret(v2812644) 发表:聚焦时间不同,当然会导致聚焦的峰形及分布不同.此外,也会影响聚焦结果的稳定性.所以很多因素是需要优化的哦

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