tigertooth
第8楼2010/07/01
你的流动相是等度还是梯度洗脱,如果是等度,道理上保留时间不会差这么多,但你还要考虑系统压力和流量准确性的问题。你所谓的半制备是指泵还是泵加检测器,如果只是泵,那死体积基本可以忽略不计,因为那只是泵头的原因,但半制备的泵一般流量稳定性不好,你还要查一查有没有漏的地方或泵流量的准确性。
如是梯度洗脱,那么泵和系统的的死体积就影响大了。
峰尖与不尖不是主要问题,关键看做的什么样品,PEG标样可能就峰比较尖,比较窄,但DEXTRAN一般就比较宽,峰尖处比较圆。但即便是PEG与普通HPLC的出峰比较,其峰宽和峰型也宽很多。我所为的馒头峰是与普通HPLC的峰比较而言。
溶剂峰一般用RI检测器才看得到,其它检测器是看不到的。
hnkjzyj
第9楼2010/07/01
谢谢tigertooth....
我也不清楚所谓的半制备是什么,只知道是半制备系统,平时上样量比分析型的要多好多,柱子一般都是自己填的...
我用的是等度洗脱,只用0.15M NaCl 洗脱,因为样品是多糖,没有特征吸收峰,所以采用自动收集器收集,然后苯酚-硫酸法测定的...
还有,就是同样的样品,我上TSK G4000PWxl柱子,显示的是一个很宽的均一峰,本来柱体积就小(大约应该是12ml左右吧,7.8*300mm柱子),但是多糖出峰的体积就有5ml左右,但是同一个样品我上Sepharose CL-6B层析柱,却看出来有好多杂峰,这是为什么???
莫非TSK分辨率还没有Sepharose的层析柱分辨率高???
boykenneth
第10楼2010/07/02
制备设备和分析设备的管路内径是有区别的,实际上当色谱柱一连接到仪器上时,相关的死体积等因素就不该用色谱住单一去评论了,而是把仪器和色谱住整体当作一个系统去评价。就好比很不错的柱子却装在一套很差的设备上,那他会表现出很好的柱效么。