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【分享】双向电泳常用溶液配方

毛细管电泳（CE）

  • 双向电泳常用溶液配方



    A. 水化/上样缓冲液(rehydration/sample lysis buffer)

    水化上样缓冲液（I） 1ml





    urea



    8M



    0.48g



    CHAPS



    4%



    40mg



    DTT



    50~65mM



    7~9.8mg



    or TBP



    2mM



    10µl



    40% Bio-Lyte



    0.2%(w/v)



    5µl



    1%溴酚蓝



    0.001%



    1µl



    MilliQ水







    650µl





    水化上样缓冲液（II） 1ml





    urea



    7M



    0.42g



    thiurea



    2M



    0.152g



    CHAPS



    4%



    40mg



    DTT



    50~65mM



    7~9.8mg



    or TBP



    2mM



    10µl



    40% Bio-Lyte



    0.2%(w/v)



    5µl



    1%溴酚蓝



    0.001%



    1µl



    MilliQ水







    650µl







    1. 水化上样缓冲液（I）中的尿素浓度可以调高到9或者9.8M；用7M Urea和2M Thoiurea溶解蛋白的能力较单用尿素强。

    2. 目前常用的去垢剂为CHAPS，也可用Triton X-100、NP-40等代替。

    3. 可以加蛋白质酶的抑制剂和/核酸酶。

    4. 还原剂可用DTT或TBP，分离碱性蛋白时最好用TBP。

    5. 5溴酚蓝作为指示剂，可以监测上样和聚焦过程，如操作熟练，可以不加。.
  • 分
  • 该帖子已被版主-有水有渝加5积分，加2经验;加分理由:感谢凤版主分享
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  • 儒雅凤

    第1楼2010/07/06

    B．溴酚蓝储液

    Final concentration Amount

    Bromophenol blue

    1%

    10mg

    Tris-base

    50mM

    6mg

    MilliQ H2O

    to 1ml





    C. 胶条平衡液贮存液（SDS equlibration buffer）

    (50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml)







    Final concentration



    Amount



    1.5M Tris-cl,pH8.8

    Urea (Fw 60.06)

    Glycerol(87% v/v)

    SDS(Fw 288.38)

    1%Bromophenol blue solution





    50mM

    6M

    30%(v/v)

    2%(w/v)

    0.002%(w/v)



    6.7ml

    72.07g

    69ml

    4.0g

    400μl

    To 200ml



    分装后贮存于-20℃；溴酚蓝可以不加；

    用之前在加DTT(20mg/ml)或者碘乙酰胺(25mg/ml)。

    D. 10% (v/v)SDS溶液

    SDS(Fw 288.38) 10.0g

    MilliQ H2O To 100 ml

    用0.45微米的滤纸过滤室温保存(高纯试剂一般不用过滤)

    E. 聚丙烯酰胺单体贮存液（Monomer stock solution）









    Final concentration



    Amount



    Acrylamide



    30%



    150g



    N,N’-methylenebisacrylamide

    or PDA



    0.8%



    4.0g

    5.0g



    MilliQ H2O







    To 500ml



    用0.45微米的滤纸过滤(可不过滤), 4℃避光保存

0
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  • 儒雅凤

    第2楼2010/07/06

    F. 4x分离胶溶液(4x Resolving gel buffer, 1.5M Tris-Cl pH8.8)







    Final concentration



    Amount



    Tris-base(Fw 121.1)

    MilliQ H2O

    HCl(Fw 36.46)



    1.5M



    181.5g

    750ml

    Adjust to pH8.8



    MilliQ H2O







    To 1000ml



    用0.45微米的滤纸过滤，4℃保存



    G. 10%过硫酸铵







    Final concentration



    Amount



    Ammonium persulphate(APS)

    MilliQ H2O



    10%



    1g

    To 10ml



    当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。可少量(10ml)配制，分装后4℃保存。



    H. 电泳缓冲液（TGS electophoresis buffer）

    (25mM Tris,192 mM glycine, 0.1%SDS)







    Final concentration



    Amount



    Tris base

    Glycine

    SDS

    MilliQ H2O



    25 mM

    192mM

    0.1%(w/v)



    15.1g 7.55g

    72.1g 36.05g

    5.0g 2.5g

    To 5000ml To 2500ml



    该溶液的pH值不需调整，可直接在大试剂瓶中配制溶液，室温保存。



    J. 琼脂糖封胶液（Agrose sealing solution）







    Final concentration



    Amount



    TGS electophoresis buffer

    Agrose (NA or M)

    1% Bromophenol blue



    ---

    0.5%

    0.002%(w/v)



    50ml

    0.25g

    100μl



    可在锥形瓶配制，微波炉加热熔化。小份分装，室温保存。

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