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第1楼2010/07/08
综合以上所选择的一些条件作为初始条件,就可以开始下一步的目标——“找到目标化合物峰”。要找到目标化合物的峰,首先就要在我们最熟悉的C18柱上面测试一下,了解化合物的保留能力和大致的极性,具体的步骤是:先用纯甲醇做流动相,看化合物是否被洗脱下来,如果被洗脱下来峰高是多少,收集这些数据;然后流动相中甲醇的比例以10%的速度递减,即甲醇:水=90:10、80:20、70:30。。。。纯水,看流动相从最初的100%甲醇——100%水的过程中每变动10%的比例,谱图上会多些什么峰,峰高会不会发生变化,多出来的峰是从哪里来的;这个过程会有三种结果:1)纯甲醇条件下没能洗脱下来,这样说明化合物的极性很弱,保留能力非常强,应该可以考虑用正相体系来做,如选择硅胶柱;2)纯水条件下很难出峰而纯甲醇时很快洗脱下来,这意味着我们可以通过调整流动相的比例找到这个峰,并结合前面流动相比例10%变化的系列数据,选择合适的流动相。3)纯水条件下也仍然很快就出峰,这说明化合物的极性很强,此时需要结合分子的结构式来判断,有可能是哪些基团导致了样品这么快的出峰,然后采取相应的对策,考虑添加缓冲盐,调节pH,如果需要的话,甚至考虑添加离子对试剂。通常带有-NH2、-NHR、-NR2等基团的时候添加含-SO3-磺酸基的离子对试剂(如辛烷磺酸钠)以增强保留,而带有-SO3-、-PO4-等极性基团的化合物,则需添加如四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等含N+R4的离子对试剂。
2. 调整峰形 (请参看《峰形前拖解决方案》和《峰形后拖解决方案》)
《峰形前拖解决方案》http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20091030/2184029/
《峰形后拖解决方案》http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20091127/2234793/
3. 进一步完善方法
进一步完善方法,主要是解决样品中的问题,如保留时间、目标化合物与杂质的分离度等。