第1楼2005/11/02
三、多糖类药物分子量及其分布测定的意义和方法
多糖是由单糖缩合而成的链状结构物质,是自然界中广泛存在的一类生物大分子。由于多糖分布的广泛性、结构的复杂性和生物作用的多样性,使人们对它的药用研究越来越重视,它将作为一类高效、低毒、新型药物广泛应用于人类疑难疾病的治疗。
多糖是天然高分子中具有多分散性的聚合物,为了鉴定一种聚合物,首先必须测定其分子量与分子量分布,这是高分子化合物的最基本参数之一。多糖的分子量测定是研究多糖性质的一项重要工作。多糖的理化性质及活性与多糖的分子量及其分布有关,如右旋糖酐分子量为10万~ 20万时能使血液中红细胞聚集,而分子量为2万~4万时,不但不使红细胞聚集,反而使已聚集的红细胞解聚,所以不同分子量的右旋糖酐在临床上有完全不同的应用,这些现象在羟乙基淀粉、羧甲基淀粉及一些果胶中也有类似的情况。又如低分子肝素是近十几年发展起来的新一代肝素类抗血栓药物,其抗血栓作用优于肝素,而抗凝血作用却低于肝素,它具有生物利用度高,体内半衰期长,出血倾向小,口服易吸收等特点,目前已广泛用于临床。因此对于多糖类药物,为了确保生产工艺的稳定性以及临床用药的安全有效性,分子量及其分布的测定是尤为重要的。
目前用于有机高分子分子量测定的许多物理方法,一般也适用于多糖。此外根据多糖的化学特性也另有一些化学方法。多糖分子量测定因其不均一性往往比较困难。通常所测的分子量一般只能是一种统计平均值。离心沉降法、光散射法和渗透压法均可测定多糖的分子量。离心沉降法(沉降速度与沉降平衡法)测分子量要求粒子均匀、大小形状相同,才能得到溶质与溶剂之间的清晰界面。多糖的不均性界面不易清晰。分子量较大的多糖不易制得真溶液。光散射法所测结果因凝集作用很易变大,且对于分子量一低于一万的样品测定误差大。粘度法是实验室常用且比较简便的方法,但它是一种间接的且相对的分子量测定方法,它需要通过Mark-Houwink经验公式换算才能得到粘均分子量。但是对于一种新的多糖其Mark- Houwink经验公式是很难得到的。另外还有还原末端法、聚合度法等分子量测定方法,但都存在实验繁琐误差大等缺点,不适合用于多糖类药物质控。70年代以后,由于耐压合成凝胶的出现,水相高效凝胶渗透色谱法( HPGPC)开始用于多糖的分子量及其分布的测定,它具有快速、高分辨和重现性好等优点,是多糖类药物分子量测定的较理想质控方法。