【讨论】总黄酮的紫外含量测定有两种方法，方法之间有什么区别呢？

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亚硝酸钠法源于芦丁含量测定法，并逐步用于黄酮类化合物的测定。后来发现这并不是黄酮类化合物的专属反应，因为凡具有邻苯二羟基的物质，均能用此法进行显色测量。茶叶中含有羟基苯甲酸类、肉桂酸类及原花色素等多酚类物质，这些物质都具有邻苯二羟基结构，显色反应后在504 nm有很强吸收，显然会对黄酮的测定造成干扰，所以该法测定结果偏高。AlCl3法在酸性环境下，只与酮羰基和其邻位羟基发生络合。
AlCl3法测定时，芦丁、桑色素等黄酮类物质反应强烈，而对酚酸类、原花色素的反应很小，该法对黄酮类化合物的专属性较强，适用于茶叶黄酮的测定，因此，选用AlCl3法对茶叶中的黄酮进行定量测定较适宜。

UV法测定黄酮类化合物，一是基于a-色原酮的基本结构形成的紫外特征吸收带，一是基于加入ALCL3、醋酸钠等试剂，引起紫外吸收峰的移动进行定量分析。实际上，由于黄酮类成分中多存在共轭体系或交叉共轭体系，所以多呈现颜色，因此总黄酮的含量测定时，不是“通过NaNO2+AL（NO3）3法显色后测定”，而只是通过这种试剂，改变吸收峰位置，便于进行检测。另外，中药中总黄酮的含量测定法，不是就这两种途径，许多都不用加入这种试剂，用一阶导数光谱法（如淫羊藿总黄酮的测定）、双波长分光光度法（如黄芩苷的测定）都可以完成的。而且，个人觉得，现在都用HPLC了，完全可以用HPLC替代UV。