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【求助】PTI的STROBE专家请进,请教几个仪器使用问题

分子荧光光谱

  • 我是PTI的用户,总体感觉还是不错,现在有几个问题想请教
    (1)IRF的测定对lifetime影响大吗?我的理解是对一种浓度的ludox,在特定激发下的IRF intensity是一样的,但不同的测量样品间的最大intensity可能不一样,在这种情况下,我的IRF是以最强的那个样品的intensity为参照,还是有其他要求?此外,控制IRF推荐的方法是用ND filter,但我们没有ND,可不可以配置不同浓度的ludox以最接近样品intensity来代替?
    (2)对于inner filter effect,我们曾采取PTI推荐的用triangle的皿,即所谓的right angle,但是那种皿很容易坏了(我们的4个1w多块买的,不到半年就坏了),可不可以用一般的front face 的皿,然后调节样品台到60度,即所谓的magic angle。
    (3)我们原来的strobe没有polarizer,最近打算自己配两个手动的glan thompson的自己装,在安装时有什么需要特别注意的吗,比如校准之类的?我的理解是只有laser穿过polarizer就可以了,对吧。

    实在不好意思,这么多问题,也不知PTI的高人能看到不,或者其他用过PTI的朋友能帮忙解释一下。

    在这里再表扬一下PTI,真是不错的说。
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  • 锐飏

    第1楼2010/07/25

    1.可以用不同浓度的ludox去做散射剂
    2.triangle的皿是什么样子哈, 不知道作者是否能将图片上传呢?一般来说只要检测器能够检测到正确的信号就好了。
    3.手动的偏振应该没问题,但是希望版主在测试之前先要保证光路的准直。这样数据才可信。最好咨询一下PTI的专业人士

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  • cheng7692

    第2楼2010/07/26

    谢谢楼上回答
    triangle就是三角形的,而不是方形的。
    对于IRF,是不是其值与样品最大值接近为最佳。
    对于偏振,如何保证光路准直呢

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  • 锐飏

    第3楼2010/07/26

    为什么不能用普通标准的荧光比色皿呢?是否是因为你的样品架跟普通的不一样?另外你的三角比色皿是45度么?
    其实一般不来说手动偏振问题不大,要是你的仪器要安装自动偏振片,那就得用激光去调整光路。

    cheng7692(cheng7692) 发表:谢谢楼上回答
    triangle就是三角形的,而不是方形的。
    对于IRF,是不是其值与样品最大值接近为最佳。
    对于偏振,如何保证光路准直呢

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  • cheng7692

    第4楼2010/07/26

    基本明白了,之前的是45度的,是因为样品的光透过性问题,为防止光散射和样品的滤片效应。我的样品驾是可以调节角度的。

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  • 锐飏

    第5楼2010/07/27

    有机会发几张你仪器的照片上来让大家学习一下啦

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  • cheng7692

    第6楼2010/08/02

    好 啊,下周吧,等我把配的polarizer装上再照

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  • jack_zxd

    第7楼2010/08/13

    cheng7692 兄, 您好

    不好意思,这段时间一直在外出差,今天才看到贴子,希望没有耽误您的事情, 我的邮件是:jack.zxd@chansn.com 请和我联系,等我们联系上了,有机会我会去您实验室拜访。

    对你上面提到的问题,我初步答复如下:

    1) IRF对寿命低于100ns的lifetime测量会有比较大的影响,我们的IRF的半峰宽度在1ns秒左右,如果荧光寿命为10ns, IRF将在其中占据10% ,对最终结果影响太大了,如果荧光寿命高于100ns, IRF在其中的影响不到1%,可以忽略。所我们建议用户低于100ns的寿命要做IRF,以提升结果精度,高于100ns的寿命则可以不做IRF。

    在寿命的拟合中,IRF的强度并不重要,主要是和IRF曲线形状有关,因此不必追求IRF的强度与衰减曲线完全相同,差不多就行,当然为了好看,你可以对IRF的强度进行调整。

    IRF的测量条件要求与当前样品的测量条件完全相同(狭缝宽度、积分时间等等),因此应该对每个需要IRF的样品都单独进行IRF测量,而不是不同样品混用一个IRF。

    用Ludox来测量IRF是个不错的选择,可以调制不同浓度的Ludox来达到一个合适的强度,但这样做比较麻烦,最好还是有ND会比较方便此,国内的ND会便宜不少,采购一套比较好。

    2) 对于Inner Filter Effect, triangle cuvette 是个不错的选择,只是用的时候要小心,您半年就坏4个也算难得了,(可以称为triangle cuvette killer :-) ) 您说front face 皿是什么样的,如何放在样品架上,还能调整角度? 我不太清楚,你有照片可以发个上来吗?

    3) 对于Polarizer, 我觉得您自己做会有很大难度,不过如果实验精度要求不高,可以自己尝试一下,校准会比较困难。我推荐您采购PTI原产的手动Polarizer,这样会比较好。

    以上说明请您参考,请尽快与我联系,方便交流。

    jack.zxd

    cheng7692(cheng7692) 发表:我是PTI的用户,总体感觉还是不错,现在有几个问题想请教
    (1)IRF的测定对lifetime影响大吗?我的理解是对一种浓度的ludox,在特定激发下的IRF intensity是一样的,但不同的测量样品间的最大intensity可能不一样,在这种情况下,我的IRF是以最强的那个样品的intensity为参照,还是有其他要求?此外,控制IRF推荐的方法是用ND filter,但我们没有ND,可不可以配置不同浓度的ludox以最接近样品intensity来代替?
    (2)对于inner filter effect,我们曾采取PTI推荐的用triangle的皿,即所谓的right angle,但是那种皿很容易坏了(我们的4个1w多块买的,不到半年就坏了),可不可以用一般的front face 的皿,然后调节样品台到60度,即所谓的magic angle。
    (3)我们原来的strobe没有polarizer,最近打算自己配两个手动的glan thompson的自己装,在安装时有什么需要特别注意的吗,比如校准之类的?我的理解是只有laser穿过polarizer就可以了,对吧。

    实在不好意思,这么多问题,也不知PTI的高人能看到不,或者其他用过PTI的朋友能帮忙解释一下。

    在这里再表扬一下PTI,真是不错的说。

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