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【求助】求高效液相专家指点

液相色谱(LC)

  • 我用安捷伦1200LC测定多酚物质标准品图像,但是一直得不到结果,做了好多次了,现在的状况是不到三分钟就会有一个响应值很大的倒峰(有时会紧邻着个别小峰),后边也为找到标准品的峰,请高手明示下,我该怎么办啊?流动相为1%的乙酸水和甲醇,流速在0.5--1.0之间,标准品用流动相溶解,进样量为10ul,柱温30.另附图如下
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  • 老多_小多

    第1楼2010/08/31

    流动相适合吗?
    谁提供的条件,以前是否做过呢

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  • sacid

    第2楼2010/08/31

    倒峰的问题倒不是很大,有时候因为样品中其他物质影响,会造成倒峰。但是从你的谱图上看,这个方法似乎不是很好。最好找找别人的分析方法做个参照。

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  • crack5858

    第3楼2010/08/31

    你说用流动相配置对照品?但是从图像看,你配制方法有问题。流动相有两相,
    应该用5%c,95%d配制比较好,另外需要说明,你的对照品浓度太低,多酚的大部分紫外波长在280nm,花青素是520nm,黄酮苷类是360nm

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  • duanjiezz

    第4楼2010/08/31

    是否进样方式引起的呢,您可以改变进样方式,比如满环进样,P进样,ul携带,如果您用250mm的柱子,0.8的流速,那么根据出峰位置判断,就更有可能是进样引起的了。试试吧,告诉我结果,不行的话咱们再想办法!

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  • darcy123

    第5楼2010/08/31

    没有做过,但是参考了别人的文献,得出的方法,我测定的是儿茶素,表儿茶素,没食子酸,槲皮素等六种物质,您有好的方法或建议吗?望不吝赐教

    老多_小多(emoc98311) 发表:流动相适合吗?
    谁提供的条件,以前是否做过呢

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  • darcy123

    第6楼2010/08/31

    您好,我刚刚接触液相色谱,对于您说的进样方式我甚至还不懂,所以我也不知道该怎么尝试,我只在仪器上看到标准进样字体。还有我的色谱柱是150mm的,您看我该怎么办啊?

    duanjiezz(duanjiezz) 发表:是否进样方式引起的呢,您可以改变进样方式,比如满环进样,P进样,ul携带,如果您用250mm的柱子,0.8的流速,那么根据出峰位置判断,就更有可能是进样引起的了。试试吧,告诉我结果,不行的话咱们再想办法!

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  • darcy123

    第7楼2010/08/31

    C是甲醇,D是1%的乙酸,是甲醇的比例高,还是乙酸的比例高能够分离呀

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  • astromote

    第8楼2010/08/31

    首先我觉得楼主的梯度程序设置的不是很好,34min前什么峰都没有,说明甲醇的起始浓度太低。可以适当改进一下。不要完全照搬文献上的设置,不同的仪器都不一样的,文献只能用来参考。
    另外,从色谱图上来看,前面出的倒峰并不影响样品的分析,一般出倒峰是因为样品里面有有机盐的存在,这些物质的紫外吸收比流动相更小,所以会有倒峰,但是一般这种盐几乎没有保留,都在溶剂峰处出峰,不会影响样品分析,楼主不用在意。除非您是要分析这些物质。希望我的看法对您有一点帮助

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  • darcy123

    第9楼2010/08/31

    ]大家好,根据意见我调整了流动相比例,这次是甲醇(C)的比例高,D(乙酸),进样量为10ul,柱温30,还是出现了倒峰,但还是出峰时间较早,怎样调整使其分开并错后啊。

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  • jixf_1114

    第10楼2010/09/01

    请问:你在梯度结束后,即40分钟后有没有把梯度调整到初始梯度,并平衡,然后再进下一针样品?

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