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【求助】求助:液相 反相色谱柱问题?

液相色谱(LC)

  • 条件:1.C18的反相色谱柱,分析处理甲基丙烯酸酯(MMA),样品中还含有极微量的乙酰半胱氨酸,采用甲醇和水作流动相,样品均溶解在纯水中。每次测样很多,大概有80来个吧。
    2 每次操作也都是将流动相过滤超声后使用。用完后,用5%的甲醇冲洗半小时,再用纯乙晴冲洗一个小时。
    3 因为只是分析甲基丙烯酸酯,标样也就配制了不同浓度的甲基丙烯酸脂。

    问题:第一次实验开始用的是新柱子,先做标样MMA,出的峰很漂亮,时间也一致。开始测两样品的时候,出封时间随着测量样品时间的增加,慢慢的会从8min增加到9min。但是峰型还是很尖。
    第二次测试,同样的步骤,但是封出现拖尾,出封时间从9min后移至11min。
    第三次测试,出封在10min,并且基线波动非常大,以至于根本就不能够用了。。

    测试的仪器没有控温柱,我怀疑是温度的原因。因为这几天室内温度一只在降低。我只是对MMA进行定量的分析,晚一点点出封,只要和标样时间一致我就觉得可以用的。不知道这样可以不?

    关于封拖尾,我觉得是测试时间太长,导致柱效降低。因为第二次试验结束,马上就得第三次实验,我就用5%的甲醇冲洗半小时,再用纯乙晴冲洗一个小时。到第三次实验的时候,峰型图的基线波动十分大的话,我想柱子是不是已经失效了。

    我现在想让色谱柱再生。我看了很多再生的资料,都是因为有缓冲盐作流动相后柱子的处理,我样品不含缓冲盐,那么我怎么冲洗改进下更好呢。。。希望大家指点下。。
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  • 有水有渝

    第2楼2010/08/31

    应助达人

    甲基丙烯酸酯这东西在水中的溶解度好吗?样品的基质是否复杂,如果复杂,最好加一保护柱,还有一次性做这么多样,后面的样是不是都在下半夜进样了,昼夜温差大吗?

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  • xuweikuo0

    第3楼2010/08/31

    你好。。我测量时流速都是0.8mL/min。
    你的意思是每次提高点流速,出峰时间会缩短是吗?

    duanjiezz(duanjiezz) 发表:把流速提高些

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  • xuweikuo0

    第4楼2010/08/31

    关于溶解度,我计算过,在我样品测试的范围内事全部溶解的。
    样品成分不复杂,第一次测试的时候,出峰还是很干净,分析得很清楚的。
    但是后来估计是柱子效果下降,峰很乱,基线也不平了。
    昼夜温差有1度,我觉得出峰时间后延和温度有一定关系。但是我只需要确定样品出峰在哪,用面积定量就好了,样品多也得连着测完。

    谢谢啦~~

    有水有渝(xky0230699) 发表:甲基丙烯酸酯这东西在水中的溶解度好吗?样品的基质是否复杂,如果复杂,最好加一保护柱,还有一次性做这么多样,后面的样是不是都在下半夜进样了,昼夜温差大吗?

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  • 有水有渝

    第6楼2010/08/31

    应助达人

    楼主是自己开发的方法吗,有没有做过耐用性试验,色谱条件是什么,这个样品溶液的稳定性如何,如果基质不复杂,应该污染不大才对。

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  • 1818

    第7楼2010/09/01

    可能是楼主每次做完样品过后,色谱柱清洗时间不够造成的吧!!

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  • tjbeik

    第8楼2010/09/19

    我是做色谱试剂的天津北科化学品有限责任公司,看看你做实验的色谱纯度吧
    022-26246351

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  • 21kgtan

    第9楼2010/09/19

    如果是新柱子,而且流动相不含盐,短时间内就坏掉的可能性不大,但也不排除。只能逐步检查是温度、样品、柱子的问题了
    两针之间的时间间隔温度变化应该不大,出峰时间变化大不大?
    你在峰型变差以后还有再一次检测标样没?进一针看看有否拖尾
    你可以试试将峰型不好的该样品换根柱子跑相同方法
    观察一下系统压力变化,拖尾有可能系统或柱子污染

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  • fobhcff

    第10楼2010/09/22

    柱子产生拖尾,很平常,解决的最简单办法是:安装保护柱,对色谱柱修复起不到关键作用。

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  • liuyuanzi

    第11楼2012/09/18

    C18反相色谱柱不应该用5%甲醇冲洗,流动相甲醇不应该低于20%

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