【求助】求助：检测样品时出现问题？

sxtiansh1

2010/09/03

私聊

液相色谱（LC）

最近在做原料药的有关物质方法验证，小弟是头一次搞这个东西，有很多问题都不大明白，特向各位老师请教。有些问题请不要见笑。。。。
有关物质采用的HPLC方法
岛津的液相10AT
流动相：0.05mol/L的磷酸二氢钠(PH=3)：甲醇：乙腈=90:6：4
柱子：C18
流速：0.8ml/min
检测波长：210nm
进样量：20ul

问题
1、在进行检测时，空白在2.8-3.1分钟之间有一个很小的峰（峰高大概是0.07mv，想忽略不计可是他毕竟占一定的峰面积啊）。不知道是什么原因，
2、此空白峰出峰时间和我们样品的一个杂质（丙氨酸）出峰时间正好重叠，而且峰形不好，达不到注册要求的（对称性和分离度），但主峰符合要求。

我用的就是流动相溶的，进的空白溶剂就是流动相。

此肯定需要控制的，含量还不小，国家药典有用薄层色谱方法控制，但是小弟不大熟练那个分析方法，而且即使将此杂质分开来测，那么在检测杂质总量的时候它是无法定量的，所以它影响杂质的总量。小弟有点笨，希望老师给与指导，谢谢。

我们的空白溶剂是流动相，直接进的流动相。

1、药典上有薄层色谱的方法进行控制，但是有关物质需要知道总量，因为丙氨酸的含量无法定量，所以总量是很影响的。指导法则杂质的总量不能超过2%，而药典的对丙氨酸的控制为1%以下。
2、流动相的水和有机溶剂的比例，我调试过了，丙氨酸的峰始终在2.8-3.1之间，很让我崩溃。
希望老师指导。