【邀您来解析1】邀您来解析之色谱柱参数

买色谱柱时，最关心的是色谱柱中的柱效和分离度

名词解释

柱体积：严格说来柱体积确实是需要减掉填料体积的。填料堆积密度约为0.6g/ml，所以柱体积计算的近似公式为：3.14*R*R*L-3.14*R*R*L*0.6/d 其中d是无孔二氧化硅的密度，大约为2.32g/ml。（引用）
外水体积：色谱柱内凝胶颗粒间隙，这部分体积称外水体积，亦称间隙体积，常用Vo表示。
内水体积：因为凝胶为三维网状结构，颗粒内部仍有空间，液体可进入颗粒内部，这就分间隙的总和为内水体积，又称定相体积，常用Vi表示。 不包括固体支持物的体积(Vg)。
峰洗脱体积：是指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液的体积，常用Ve 表示。当使用样品的体积很少时，(与洗脱体积比较可以忽略不计)，在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。当样品很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点 (或半高处)。

色谱柱柱效测定采用什么溶剂，什么方法？测定柱效选用的样品是什么，柱效合格的标准是？一般多长时间会测定一次柱效？

色谱柱柱效主要通过两种途径测定。一是色谱柱生产商提供的测试样品，按照他们提供的报告给予测定，并记录和保存相关数据。二是通过测定苯环类物质，如苯，甲苯，联苯，萘以及混合液等。其中有些是有国家标准品买的。测定甲酸的时候因为ph原因，条件需要再改善。条件一般是流动相：甲醇:水（85:15），流量0.8ml/min，紫外光度检测器：波长254nm，进样量 5μl-10μl

柱效一个评判标准是达到色谱报告上数据。

色谱柱峰型同一样品下变差，或压力上升时，需要测定柱效。

Eclipse Plus C18（4.6*250mm，5um），这些字母和书籍代表的是什么意义呢？


C18：填料类型

4.6*250mm：柱内径*柱长（单位：mm）

5um：填料粒径

在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。这个体积还含有柱后管路的体积吧？不同的管路，相同的色谱柱的Ve应该不一样的。

名词解释

分离因子：系指两组分保留值(TR或VR)之比值，常用来表示柱子的选择性。
分离不纯度：表示一峰物质混入另一峰物质中的百分含量。
分辨率R：它是指混合物中相邻两组分在色谱柱中的分离情况。等同于相邻两组分色谱保留值之差与此两组分色谱峰峰底宽度总和之半的比值。
总分离效能：指相邻两组分色谱保留值之差与此两组分半峰宽总和之半的比值。
柱效率：色谱柱在分离过程中由动力学因素所决定的色谱分离效率。
有效塔板数：指由调整保留值与色谱峰宽的比值。

想问一下：
如何根据分子量大小来选择色谱柱呢？分子量大的选什么色谱柱，小的选什么？怎样划分大分子和小分子?

Eclipse Plus C18（4.6*250mm，5um），这些字母和数字代表的是什么意义呢？

Eclipse Plus 应该是代表安捷伦旗下的一个系列，就像WATERS有Xterry,symmetry等不同系列一样，安捷伦也有Extend,HC,等系列
C18是代表柱子内部与硅羟基键合的碳分子上碳原子的数目，
250mm是长度，同样的柱子，长度越长，理论塔板数越多，分离的时间越长，
4.6是柱内径，内径越小，分离效果越小，当然柱压也会升高，
5um是内部填充颗粒的直径，同样也与分离度有关，颗粒细，同样的体积，填料就多，那么吸附交换的次数就增多当然柱压也比较高