【第三届原创参赛】多糖提取分离的基本流程

版主的经验很值得学习啊!希望以后能多多发关于多糖分离得帖子。

已经设置精华，并置顶~

另外，提个小建议：希望在最后的总结部分，能看到更多关于你个人有实验中的心得体会，我相信，这是大家都希望看到的。

嘿嘿嘿~以后会陆续上传的~

恩 下次继续补充~

多糖是继核酸和蛋白质之后发现的对生命活动有重要作用的生物大分子，在细胞信息的识别和信号的传递中起着重要作用。目前，在抗癌、抗肿瘤药物新化学实体筛选时，多糖类物质也受到国内外专家的广泛重视。但是，多糖是一类大分子，机理研究比较困难，特别是多糖的结构，尤其是空间结构更是难点，所以，希望楼主能够在多糖的结构上做进一步的后续研究，并对这些研究做后续报道，我们渴望新帖面世。

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多糖提取分离的基本流程


长期以来，天然药物化学与药理学研究工作侧重于脂溶性化学成分，如生物碱，苷类等，而对水溶性多糖类有效成分重视不够，在天然药物活性成分研究中往往将多糖作为杂质除去。近年来，国内外对多糖的研究比较活跃，其作为生物效应调节剂，主要具有抗肿瘤，抗炎，抗凝血，抗病毒，降血糖，降血脂等活性。

今天我就和大家探讨一下多糖的提取分离方法。

（一）提取

水提得到的粗多糖水溶液，加入95%乙醇使含醇量达80%，4摄氏度静置过夜，多糖析出。减压抽滤，用95%乙醇洗至上清液无色，挥干醇。

（二）除蛋白

这是至关重要的一步，由于蛋白是大分子，它的存在会干扰多糖的纯化。一般选用sevage法萃取或离心，多糖浓度为1mg/ml, 氯仿-正丁醇比例通常在3:1~5:1之间，变性的蛋白质一般在两相交界处产生一条白色的带。建议进行小试，确定最佳比例，同时确定除蛋白的次数，如果含量较多建议八次以上，含量较少的话四到五次即可。

（三）检测

除蛋白前后用紫外分光光度计检测280nm（蛋白质）和260nm（核酸）下的吸收值，多糖浓度为0.4mg/ml对照验证除蛋白的效果。需注意的是氯仿的比例不宜太大，否则可能会破坏多糖。萃取时产生的乳化现象，可用超声除去。除蛋白后的多糖水溶液会有很浓的有机试剂味道，可以用悬蒸除去。

(四)离子交换纤维素(DEAE-纤维素)进行初步分离

一般选用DE-52型离子交换纤维素

<1 >柱的预处理

加蒸馏水浸泡过夜，期间换几次水，每次除去细小颗粒，，用0.5mol/LHCl溶液浸泡1~2h, 蒸馏水漂洗至中性；再用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1~2h, 蒸馏水漂洗至中性。

<2>洗脱

样品浓度在20mg/ml左右。先用水洗脱，再用NaCl梯度洗脱，小试时的梯度应密集一些，0.05, 0.1, 0.3, 0.5mol/L洗脱，每瓶8ml, 10min左右一瓶即可。根据紫外检测的结果，再进行梯度的修改。

< 3>合并流分

硫酸-蒽酮法结合紫外检测


（1）硫酸-蒽酮试剂的配制

称取0. 1g蒽酮至容量瓶中，加少量浓硫酸，搅拌使其溶解，加浓硫酸至50ml摇匀，得0.2%的硫酸-蒽酮试剂，尽量现配先用，也可放4摄氏度冷藏备用，若颜色变绿，则说明已变质不能使用。

（2）方法

馏分隔管检测，每管取0.5ml，在冰浴中加入2ml硫酸-蒽酮试剂，然后在沸水中煮10~15min, 自来水冷却，放至室温。

（3）紫外检测

主要看610nm出吸收值，合并馏分。

（五）凝胶G进一步纯化

通常采用G-100或G-200不断进行纯化

（六）纯度检测

采用高效液相凝胶柱进行检测

总结
以上就是本人在多糖提取分离过程中的一些步骤和小心得，愿与大家分享，互相学习，互相进步，共同为加快多糖研究的进展推波助澜~

很详细，特别是除蛋白那段，关于小试的提醒非常有益于我现在的工作。

柱的预处理是很关键的一步

可以将你的工作整理整理，或者谈谈你的心得体会，来发个原创啊

楼主分出的多糖，大多是什么状态的？