【转帖】氯霉素在动物体内残留问题研究进展

2 氯霉素的作用机理

氯霉素的抗菌作用机理，在于抑制菌体蛋白的合成，它作用于核蛋白50s亚基上的肽基转移酶，使肽链不能向新附着的氨基酸上转移，因而使肽链延长受到抑制，同时能特异的阻止mRNA和敏感的核蛋白结合。由于哺乳动物的核蛋白体与细菌不同，系由40s亚基和60s亚基组成的80s核蛋白体，氯霉素对此核蛋白体无作用，故氯霉素对哺乳动物蛋白质的合成无作用。

3 氯霉素的残留问题

随着氯霉素应用的增加，人们逐渐发现其对人类有很大的毒、副作用，可引起再生性障碍性贫血和其他恶性血液病。而且，长期微量摄人氯霉素不仅使沙门氏菌、大肠杆菌产生耐药性，而且还会引起机体正常菌群失调，使人类易患各种疾病。氯霉素在动物体内的残留，通过肉、蛋、奶等传递给人类，在不知不觉中使人体受害。1977年Ionoval就已经报道了氯霉素在禽肌肉内残留的消除时间及规律，并报道了相应的数据。氯霉素在禽肌肉组织的消除时间是2～3 d，而氯霉素在蛋白及蛋黄中以1肚g／g的高浓度需6 d排泄。残留浓度的增加与疗程呈反比，并与蛋的形成机制相关。蛋白可以在12~14 h内形成，而蛋黄形成需10~20 d，可见抗生素残留在蛋白和蛋黄内的消除可持续2～22 d。此后又有人进行了大量试验，发现氯霉素在鸡体内广泛代谢为去氢氯霉素(DH—CAP)和亚硝氯霉素(NO—CAP)衍生物，同时测定了在肾脏、肝脏中的残留情况。

1994年Heitzman给牛、猪及禽单剂量的14C-CAP口服，给药3 h或5 h后定性或定量的测定血、血浆、肝脏、肾脏、肌肉、脂肪中的氯霉素极其代谢产物的残留，发现氯霉素在动物体内的代谢消除存在很大差异，其代谢的共同点是肌肉组织中原形药物最多，氯霉素在猪体内的代谢与牛和禽差异很大(肌肉组织除外)，在牛和禽的肝脏组织中药物的主要残留形式是氯霉素(CAP)、氯霉素葡萄糖酸苷(CAPG)和Hyocroxyam—pheni—col(HAP)。葡萄糖酸苷结合物是猪血浆和脂肪中最主要的代谢物形式，也是猪肾脏里最多的代谢形式。

2002年西南农业大学研究了鸡蛋中氯霉素的残留和消除规律，结果发现蛋鸡多剂量内服氯霉素后，氯霉素在鸡蛋中的药动力学特征是：易于吸收，多分布于蛋黄；氯霉素在蛋黄的残留水平高，且在蛋黄的消除较蛋白缓。相继的佟恒敏等对氯霉素在鲈鱼体内药物动力学及残留规律研究中发现，氯霉素口服给药后，在鲈鱼体内吸收迅速，分布广泛，体内消除半衰期较长，组织中药物浓度较高，高于氯霉素对大多数细菌的最小抑制浓度(0．01～ 5．O0~g／mL)。根据血液与组织动力学参数，结合临床应用，提出合理给药方案：按照40 mg／kg．b．w的剂量，1次／d。动物食品中氯霉素残留对人类健康构成潜在的危害已被越来越多的人认识。美国仅允许氯霉素用于非食用动物，规定在动物食品中不得检出氯霉素。欧共体不允许氯霉素用于产奶母牛和产蛋鸡，在其他动物的使用上也有限制，并严格规定肉中的氯霉素残留量不得超过10~g／kg。我国还没有制定氯霉素残留的食品卫生标准，为了保障人民的健康及扩大食品的贸易往来，建立灵敏度高，特异性强，简便易行的动物性食品中氯霉素残留的检测方法是非常必要的。

4 氯霉素的残留分析

4．1 各种残留分析方法

氯霉素残留方法的建立始于20世纪70~80年代，到现在为止，已相继建立起了气相色谱、液相色谱、薄层色谱、放射性分析、微生物法及免疫学检测等方法。最为灵敏的气相色谱检测方法是1974年10月在AOAC年会上，Jacabson等提出的。德国Russel首先报道了液相色谱法检测氯霉素的残留。Arnold和Somogyl建立了放射免疫分析试验方法，Camphell等建立了酶联免疫吸附测定法。另外还有人采用单克隆抗体竞争性酶联免疫法测定猪肌肉组织中氯霉素残留。检测限为25 t~g／mL。更灵敏的亲合素一生物素酶联免疫吸附测定法也已成功建立。检测限达10>g／kg。目前已有测定氯霉素的试剂盒，如EMIT试剂盒，Lacartr Test试剂盒。

4．2 氯霉素残留分析的性状

(1)国外现状。1992年，Nagata等报道了用液相色谱法测定动物肌肉和养殖鱼肌肉中的甲砜氯霉素和氯霉素的残留。试样用乙酸乙酯提取，提取液浓缩干燥后的残留物熔于3 的NaC1溶液，正己烷脱脂，水相用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯浓缩干燥后用正丁烷溶解，通过Sep—paK Horisil柱净化后，用ODS柱分离，225 D_m和227 nm检测，当氯霉素为0．1 t~g／g时，平均回收率大于74．1 9／6，检出限量为0．O1 g／g。Arnold等报道了肉、蛋、奶中氯霉素的放射免疫痕量分析，对于用氯霉素治疗的动物组织和其他可食用产品，此方法检出限量为0．2>g／kg，1~g／kg以上的氯霉素残留能被准确定量，在蛋、肉中平均回收率为85 9／6，在奶中回收率高于95 。1984年Gwendolyn等用竞争酶联免疫法测定牛肌肉组织中氯霉素残留，最低检出限量可达1 t~g／kg，特异性也很好。另外还有采用单克隆抗体竞争性酶联免疫法测定猪肌肉组织中氯霉素残留的报道。随着研究工作的深人发展已有测定氯霉素的试剂盒投放市场，如EMIT试剂盒，用于经氯霉素治疗后人血清中氯霉素含量的分析，此试剂盒主要适用于医用日常分析，该方法与高效液相色谱法及微生物学方法相比较具有明显的优点。经大量试验，D J Berry等曾提出用EMIT试剂盒的酶免疫法代替高效液相色谱法，但它灵敏度不高，只能检测25 mg／kg以上氯霉素的含量。后来荷兰推出了测定氯霉素残留的酶联免疫测定试剂盒Quik card，现又称Lacartr test试剂盒，该试剂盒可测定牛、羊、猪等肌肉中氯霉素残留，检出限量为1～3~g／kg，也有人用它检测牛奶中氯霉素的残留，试样不经预处理检出限量为5～10~tg／kg，样品经预处理及浓缩后检出限量可达1~g／kg以下，也有用它检测鸡蛋、尿液中氯霉素的报道。另外，还有用单克隆抗体亲合素一生物素酶联免疫法测定猪肌肉组织中和牛奶中氯霉素残留的方法。

(2)国内现状。1998年陈家华建立了家禽组织中氯霉素残留的快速检测，用乙酸乙酯提取样品，将氯霉素硝基基团在酸性条件下用氢还原，按照Nielsen(1975)的纯胺NET(N一1一萘乙二胺盐酸盐0．8 +EDTA 0．1 )溶液衍生偶合法，形成红紫色的 -1一萘乙二胺氯霉素筛选家禽是否含有氯霉素。氯霉素检测限为10 gg．,／g，样品中含四环素类、青霉素类、氨基糖苷类、红霉素、新酶素、头饱菌素类均不十扰测定。为了快速、简便、灵敏地测定牛奶中

的氯霉素残留，2003年中国疾控中心营养与食品安全所的蒋定国、杨大进等建立了高效液相色谱分析法。此分析法把牛奶样品先用含有1％高氯酸的乙酸乙酯沉淀蛋白质和提取氯霉素，提取液浓缩干燥后用0．5 mol／I 高氯酸溶液溶解，以正己烷去除脂溶性杂质，在波长278 nm处用高效液相色谱仪测定氯霉素。本方法最低检出浓度为11~g／kg，氯霉素浓度在20～100 t~g／kg范围内，此方法平均回收率为88．0 ～97．7 ．RSD为53 ～64 。本方法适于牛奶中氯霉素残留的监测。2002年何方洋等用重氮化方法将氯霉素与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联，制备免疫抗原和包被抗原，用EI ISA方法进行鉴定。将偶联抗原用弗氏佐剂乳化后免疫德国大白兔，制备多克隆抗体，并用硫酸铵沉淀法初步纯化，用亲和层析法进一步纯化。用所得抗体建立竞争酶联免疫吸附分析法(EI ISA)检测氯霉素．最低检测限为0．3~g／mt 。