【第三届原创参赛】浅谈甾体类化合物的分离与结构鉴定

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浅谈甾体类化合物的分离与结构鉴定

在植物环己烷或石油醚萃取部分，有很多小极性的化合物，并且这些化合物之间的极性差异也很小，分离时可能会遇到很多困难，即使分离得到了单体化合物，结构解析时也是一件很不容易的事，不管是氢谱还是碳谱中，都在高场区出来一堆信号，有时氢谱中的积分都不一定能积准，碳谱的高场区就像个小树林，密密麻麻的全是信号，看着就头疼。由于我曾从一植物的环己烷层中分离得到了多个甾体类化合物（主要为豆甾类），下面就我在实验过程中在分离和解析甾体类化合物的一点经验跟大家分享一下。

1．甾体类化合物的分离纯化
由于我做的这一部分的成分极性很小，其中的甾体类化合物均不连糖，并且我所得到的化合物的结构很相似，有的只相差一个双键或只差一个羟基或羰基，总之，结构类似，极性也就相差不大，分离也就不容易了。由于极性小，我采用的分离手段只能局限在硅胶柱或板、凝胶柱（Sephadex LH-20）。首先把粗浸膏过一遍大的硅胶柱，已达到按照极性大致砍一下段的效果，由于环己烷萃取部分有很多色素，所以接下来采用过Sephadex LH-20柱将其中的色素除去，最后得到多种没有色素的流分，这里面的成分也是很杂的，有多种类型的化合物，如黄酮类、二萜内酯类、甾体类等，由于各类型化合物间的分子量有很大的差异，接下来就可以过一个又细又长的Sephadex LH-20柱，流速一定不能太快，并且流分要接的很细，我们一般用5ml的小瓶接，尽量避免不必要的交叉。这样就有可能将甾体类化合物与其他类型的化合物分开了，最后一步，在硅胶薄层板上看一下，如果成分简单，分离度良好，就采用制备薄层色谱，将单体化合物得到。
需要指出的是，制备薄层时，由于很多甾体类化合物在紫外灯下没有任何紫外吸收，这时千万不要认为没有紫外吸收的地方就没有化合物。比如这块板上的：

此时，一定要在点小硅胶板时用通用显色剂显色，确定哪里有点，该流分总共有几个点，各个点之间的上下关系，有没有紫外吸收之类的，分析清楚了，最后再去做制备薄层，如果有没有紫外吸收的点，在刮板前可以先用玻璃或报纸将板的大部分挡住，在板的另一边显色，找到该点的具体位置，以免漏掉重要的点。

2．豆甾类化合物的结构解析
因为我分到的甾体类化合物主要为豆甾类，所以我就只介绍此类化合物的结构解析了。下面是我在解析过程中总结的该类化合物的谱学上的特点：
2.1 氢谱中最高场的信号为18-CH₃，化学位移一般在0.7ppm左右。
2.2 碳谱中最高场的信号同样为18-CH₃，化学位移一般在12.0ppm左右。
实例列举：

¹H-NMR

¹³C-NMR

2.3 甾体母核上的羟基的取向不同，与其所连的碳的化学位移也会有所不同，一般情况下，α-OH连接的碳化学位移一般小于70.0ppm，而β-OH连接的碳化学位移一般大于70.0ppm。举例如下：

2.4 如果你拿到一套新的谱图，看到高场区有很多聚集在一起的碳氢信号，并且氢碳谱中最高场的化学位移值分别在12.0和0.7ppm左右，在你不确定它什么类型的化合物的时候，可以考虑一下是不是甾体类化合物（三萜类最高场的碳信号在18ppm左右，基本上没有12ppm左右的碳信号）。

最后，希望我的原创能给某些人起到抛砖引玉的作用。