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【第三届原创大赛】我的液相我做主之做液相不求人

阿三

2010/10/22

维权声明：本文为junqiwudi原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

做液相不求人---我的液相我做主

作提取分离工作的常常会用到高效液相，不管是分析还是制备，应用的时候大家都很小心吧，金贵的东西嘛，老板盯的紧！废话少说，下面谈谈我的应用体会。
HPLC流程结构图：
流动相→溶剂滤头→输液泵→在线过滤器→保护柱→色谱柱→检测器→工作站
一，首先从流动相说起：流动相应该是重蒸过的并以滤膜过滤，以除去机械杂质及有机杂质。其次流动相还应考虑PH值对色谱柱的影响，再次就是流动相的脱气，应该超声五分钟左右，如果泵前输液管出现气泡，则应考虑超声了吗或者脱气机的问题。滤膜使用中应避免水膜用于有机相。
二，输液泵包括进口单相阀，柱塞杆和出口单相阀。其中进口单相阀安装在泵头的下部，出口单相阀安装在泵头的上部，这样有利于气泡的排除，阀体是不锈钢的，里面装宝石小球，安装在阀体进口端的是宝石球座，出口处装有筛网。液体向反方向流时球落于宝石球座内，防止液体回流。
当压力发现很底时，应查看柱塞杆处是否漏液。

三，下面讲一下进样的问题，首先样品应该以流动相溶解0.45微米滤膜过滤。进样多少看具体情况而定.进样时扳到load状态下就不必说了,有一点就是注意定量环的限量,别造成样品浪费.

下面是一些常用的定量环,可自行装卸.
.

四，下面讲一讲色谱柱，为了保护色谱柱，在其前安装了保护柱。在使用前应平衡色谱柱，一般反相C18柱甲醇或已腈以10-20倍柱体积平衡，250×4.6的柱体积一般为4毫升.
当柱效降低时会出现峰型变矮变宽,当出现峰裂分时应考虑柱头塌陷问题.
再保存过程中应避免色谱柱受到强震动.
五，再介绍一下检测器,说一下紫外-可见光检测器吧,其工作原理是基于流过检测池流动相对光产生吸收有信号差.
影响紫外-可见检测器灵敏度有关的因素:
1 样品种类，当然啦，不一样的化合物，有其特征的紫外吸收，
2 样品浓度和进样体积
3 检测池的长度,这个基本上咱们是改不了的.
4 所选波长, 灯的能量,（如果检测灵敏度不行了，看是不是氘灯寿命已尽啦）。
5 噪音,
6 流动相,
7 检测器的时间常数,
8 非检测器因素,电噪音,泵脉动.
检测器问题主要就是燥声大了.
当燥声大时应该从以下几点考虑:
1 氘灯损坏,
2 检测池污染,
3 检测池有气泡,
4 是否接地线,
5 压力大致使镜片压坏,
6 参比池污染,此时应该清洗残留液
7 检测池漏液
此时好好的逐一排查了。
六最后，每次用完液相后我们必须做：
1 在使用过含盐缓冲液后最好清水清洗泵15分钟左右，此时须打开排放伐，不能使废液流过色谱柱。(不是必须哦，起码我们没这么做过）
2 关上排放阀用10%的甲醇水溶液冲洗整个系统15-20分钟，次步是为了冲洗系统内其他含盐部位。（其实用纯水也不是不可以，我们就是这么做的）
3 用纯的甲醇或已腈冲洗整个系统半小时左右，次步是为了保护色谱柱。
4 如果未使用缓冲盐，上面1，2步骤可免去。
好了,本人才疏学浅,就介绍这些吧.

分
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第1楼2010/10/22

原创大赛的作品，格式请按其他作品来整理~
如果需要帮助，可以联系我，或者回贴说明即可~
关于内容，明天帮你看看，然后给你些建议~

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wulabin

第2楼2010/11/02

恩讲得不错！

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阿三

第3楼2010/11/02

谢谢交流啊
wulabin(wulabin) 发表:恩讲得不错！

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