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将少量单细胞纯培养接种到一恒定容积的新鲜培养基中,在适宜条件下培养,定时取样测定细菌含量,开始有一短暂时间,细菌数量并不增加,随之细菌数目增加很快,继而细菌数又趋稳定,最后逐渐下降。如果以培养时间为横坐标,以细菌数目的对数或生长速度为纵坐标作图,可以得到如图1-2的曲线,称为生长曲线,对单细胞微生物而言,虽然生长和繁殖是两个不同的概念,但由于在测定方法上,多以细菌数增加(即繁殖)作为生长指标,它们的繁殖也可视为群体的生长,所以,新的适宜的环境中生长繁殖直至衰老死亡全过程的动态变化。根据微生物生长繁殖速率的不同,可将生长曲线大致分为延迟期、对数期、平稳期和衰亡期(周德庆, 2006)。
微生物生长曲线
The growth curves of micro-organisms
智舌是一种利用非特异性或低选择性交互敏感的多传感阵列感测液体样品整体特征响应信号,利用电子舌技术对微生物进行的快速检测,是最近几年兴起的一种快速、简便、有效的微生物检测方法,其综合了阻抗,伏安和电位、电流分析法的几个特点,通过检测培养基随着微生物生长的变化(把大的有机物分子转化成小的有机分子和离子),在这个过程中培养基其本身的特性(电导、电阻、粘度等等)也发生了改变,电子舌就是通过对这一变化的检测取得特征值,再通过PCA、PLS等多元统计学方法的数据处理来确定不同阶段培养基的不同特征。以往所做的电子舌微生物检测基本都应用在菌种的区分和一些发酵过程的检测(Söderström C, et al, 2003a, 2003b, Lomoborg CJ, et al, 2008)。而对利用电子舌对微生物进行定量的检测还未有报道,本研究利用智舌对微生物快速检测并建立一套快速检测的方法,其根据培养基随时间变化的速率来判断微生物延滞期向指数期转变的时间。最后利用转变时间拟合回归其原始的菌量等微生物检测指标。
检测原理图
Detection schematic
智舌检测微生物通过后期的数据处理,来拟合微生物的生长曲线图,按照微生物的生长符合典型生长曲线的特点。如图1-3所示,最初阶段为微生物延滞期,细胞不分裂不生长,对培养基组分影响较小。在II阶段为微生物的指数生长期。在此阶段微生物快速生长,对培养基组分产生巨大影响。智舌利用其传感器阵列,根据培养基组分变化,能够判断微生物延滞期向指数生长期转变的时间。最后,利用转变时间拟合回归细菌总数等微生物检测指标。