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【求助】请教高手：贝克曼毛细管电泳如何实现DNA的检测

katherine7

2010/11/17

毛细管电泳（CE）

请教高手：贝克曼毛细管电泳如何实现DNA的检测
要分离的是180-250bp整数倍的DNA片段
该以什么为标准品来进行检测呢？
现在在尝试用100bp DNA ladder用检测，但始终分离不出来
不知道是不是因为缓冲体系不好
目前用的是75μm的柱子，缓冲液0.1M 硼酸+ 0.1M Tris

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poplar_yang

第1楼2010/11/18

分子太大，极性差异太小，所以你必须毛细管长柱

0

katherine7

第2楼2010/11/18

你是说用100μm的柱子吗？
poplar_yang(poplar_yang) 发表:分子太大，极性差异太小，所以你必须毛细管长柱

0

cpudaxiao

第3楼2010/11/19

是75厘米，或更长的柱子。不是更大管径的柱子。
katherine7(katherine7) 发表:你是说用100μm的柱子吗？

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sunpengwjh

第4楼2010/11/19

贝克曼的仪器柱子长度是固定的几种么？

0

spying

第5楼2010/11/20

是固定的，应为外边有白色的管子，管子的长度是固定的！
sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:贝克曼的仪器柱子长度是固定的几种么？

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katherine7

第6楼2010/11/22

哦，是这个样子哦
cpudaxiao(cpudaxiao) 发表:是75厘米，或更长的柱子。不是更大管径的柱子。

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katherine7

第7楼2010/11/22

那请问，除了改用毛细管长住外，在分离DNA时，缓冲体系上是否要用硼酸来调pH呢？
poplar_yang(poplar_yang) 发表:分子太大，极性差异太小，所以你必须毛细管长柱

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jcok123

第8楼2010/12/06

给你介绍一篇我们课题组发表的文献吧，应该对你有帮助

Tetrabutylammonium phosphate-assisted separation of multiplex PCR products
in non-gel sieving capillary electrophoresis
katherine7(katherine7) 发表:请教高手：贝克曼毛细管电泳如何实现DNA的检测
要分离的是180-250bp整数倍的DNA片段
该以什么为标准品来进行检测呢？
现在在尝试用100bp DNA ladder用检测，但始终分离不出来
不知道是不是因为缓冲体系不好
目前用的是75μm的柱子，缓冲液0.1M 硼酸+ 0.1M Tris

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分
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poplar_yang

第9楼2010/12/07

pH值需要计算; 可设置楼梯; 硼酸可以pH4-12, NaH2PO4可以pH1-9等等
katherine7(katherine7) 发表:那请问，除了改用毛细管长住外，在分离DNA时，缓冲体系上是否要用硼酸来调pH呢？

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heguang

第10楼2010/12/07

你的缓冲体系里面为什么没有看到凝胶？Tris-硼砂的体系用来分离dsDNA是没有错，但是你一定要加凝胶进去的，没有凝胶，你怎么把不同长短的DNA分开呢？同时你还要考虑DNA在毛细管内壁吸附的问题，如果你用裸管做，你就要用有动态吸附性质的凝胶，PVP效果不错；如果你用的没有动态涂层作用的凝胶，你就必须要用涂层毛细管做。毛细管长短不是关键，一般分DNA的毛细管40-50cm足够，75um也没有问题（LIF检测），如果紫外检测就用100um。

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