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【原创】【第三届原创大赛】HPLC法测定除瘟退热颗粒中黄芩苷的含量

阿喜

2010/12/03

维权声明：本文为qweaxi原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

HPLC法测定除瘟退热颗粒中黄芩苷的含量

摘要目的: 建立除瘟退热颗粒中黄芩苷的含量测定方法。方法: 采用HPLC 法, 色谱柱为Lichrospher C18柱（250mm×4.6mm，0.45μm）, 甲醇：2%冰醋酸溶液（50：50）为流动相, 检测波长为274 nm; 流速为1.0mL /m in, 柱温为室温。结果: 黄芩苷含量在0.194μɡ~1.164μɡ范围内线性关系良好, r=0.9995, 平均回收率为97.5%, RSD= 1.06%。结论: 本法操作简便、可靠, 可用于除瘟退热颗粒的质量控制。

关键词: 除瘟退热颗粒; HPLC; 黄芩苷

行性感冒（流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，通过飞沫经呼吸道感染，往往造成暴发、流行或大流行，暴发时有很高的发病率。对于流感的治疗，西药安全性较低，毒副作用比较严重，且容易造成对抗生素的滥用。而中药感冒药更安全有效。

除瘟退热颗粒是对传统中医古方进行改良加以研究，其处方源于《伤寒论》及《太平圣惠方》，经多年临床应用，总结临床经验而成方，临床应用表明该处方有显著抗病毒和增强免疫的作用，对治疗流感有非常好的疗效。本文对颗粒中黄芩苷的含量进行测定, 对其质量标准进行考察，为进一步更加深入的建立质量标准、进行质量控制提供理论依据，为其制剂的开发提供实验基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司) ; Agilent 8453 紫外分光光度计(美国安捷伦公司); LG16􀀂W 离心仪(北京医用离心机厂) ;RE-52AA 旋转蒸发仪( 上海亚荣生化仪器厂) ;AE100电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司) ; 色谱柱: Lichrospher C18柱（250mm×4.6mm，0.45μm)。

1.2 试药

黄芩苷对照品(购自中国药品生物制品检定所); 甲醇、乙腈为色谱纯(天津康科德公司) , 磷酸为分析纯; 除瘟退热颗粒(自制中试产品, 批号100201、100202、100203)。

2 方法与结果

2.1 测定波长的选择参照2010 年版中国药典一部黄芩中黄芩苷的测定条件[1]，

并通过测定黄芩苷的UV紫外光谱, 选择274 nm为测定波长。

2.2 溶液的制备

2.2.1 黄芩苷对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品0.0097g。置于50ml容量瓶中，加75%甲醇溶解，用微孔滤膜进行滤过即得（浓度为0.194mg/ml）。

2.2.2 供试品溶液的制备：取本颗粒充分研细后精密称取1.0086g，置于25ml容量瓶中，加50%甲醇适量溶解，超声处理20 min，放置至室温，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，用微孔滤膜过滤即得。

2.2.3 黄芩药材对照液的制备：取黄芩一定量，粉碎后称取1.0g，按制备供试品溶液的方法，制备黄芩药材对照液。

2.2.4 阴性对照品溶液的制备：按提取、制备工艺制备不含黄芩的阴性颗粒样品研细成粉末，精密称取阴性样品1.0025ɡ，按制备供试品溶液的方法，制备阴性对照溶液。

2.3 色谱条件与系统适应性色谱柱为L ichrospher C18柱（250mm×4.6mm，0.45μm) ; 流动相为甲醇：2%冰醋酸溶液（50：50）; 检测波长为274 nm; 流速为1.0 mL /m in; 柱温为25; 理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于5 000。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10uL, 注入高效液相色谱仪进行测定。结果表明, 黄芩苷峰与其他峰分离度良好, 阴性无干扰。

对照品溶液

供试品溶液

黄芩药材对照液

阴性对照品溶液

2.4 线性关系的考察取制备的黄芩苷对照品溶液，精密量取5ml置于10ml容量瓶中，加入50%甲醇至刻度，摇匀，用0.45um的微孔滤膜过滤（浓度为0.097mg/ml），取一定体积的续滤液置于ep管中，分别精密吸取2、4、6、8、10、12μl在上述色谱条件下分别进样，测定峰面积，进行色谱测定。以峰面积为纵坐标，对照品浓度X（μɡ）为横坐标，绘制标准曲线.

标准曲线相关系数线性范围
Y=2641587.3343X-5 8848.4667 r=0.9995 0.194μɡ~1.164μɡ

结果表明,黄芩苷在进样量为0.194μɡ~1.164μɡ 范围内, 与峰面积线性关系良好。

2.5 精密度试验精密吸取黄芩苷对照品溶液10mL, 按上述色谱条件重复进样5 次, 每次进样10 uL,, RSD 为0.82% , 表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验取除瘟退热颗粒(批号100201) 5份, 分别按2.2%项下方法制备供试品溶液, 测得黄芩苷的平均含量为8.49 mg /g, RSD为1.17%。

2.7 稳定性试验取2.6 项下的供试品溶液, 分别在制备后0、2、4、8、12、24 h进样10 uL, 结果黄芩苷峰面积的RSD 为1.34% ( n = 6 ), 表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 加样回收率试验取已知含量的除瘟退热颗粒细粉(批号100201) 5 份, 每份约0.25 g, 精密称定, 分别精密加入黄芩苷对照品溶液1.5mL, 按∃ 2.2.2 项下方法制备供试品溶液, 在2.3 项色谱条件下测定, 结果平均回收率为97.5%, RSD为1.06% ( n = 5) 。

2.9 样品含量测定取颗粒粉末不同3批，按照 2.2.2 项下方法制备供试品溶液, 并按2.3 项下色谱条件测定, 结果见下表。

序号 1 2 3
含量（mg/g） 8.5488 8.5950 8.6125

3 讨论

3.1 采用高效液相色谱法测定除瘟退热颗粒中黄芩苷的含量，精密度高，专属性强，重现性好，可作为除温退热颗粒的含量测定方法。

3.2 通过以上实验对该颗粒剂考察了其质量标准，说明除瘟退热颗粒可以作为临床用药储备，可以用于流感的预防和治疗。

3．3 在实验中对黄芩苷进行含量测定的色谱条件摸索中，流动相为甲醇：2%冰醋酸溶液（50：50）时，虽然柱压较高，但待测成分与相邻峰得到很好分离，且峰面积较大，分离度较好，理论塔板数不低于5000。所以实验中选定其做为流动相。因中药浸膏容易吸湿，造成该颗粒具有吸湿性，所以在颗粒储存过程中一定要注意防潮的问题。

精
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阿三

第1楼2010/12/03

黄芩甘含量真的很大呀

0

阿喜

第2楼2010/12/04

呵呵，确实挺大额，有可能抗病毒就是他起的作用

0

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19861005

第3楼2010/12/04

额呵呵，你的处方能否透漏一下

0

快乐

第4楼2010/12/04

应助达人

2.7 稳定性试验这个试验的目的是什么?

0

阿三

第5楼2010/12/04

受专利保护的吧
19861005(19861005) 发表:额呵呵，你的处方能否透漏一下

0

阿喜

第6楼2010/12/04

呵呵，是看看这个东西稳定不，在这种状态下是否可以长时间不变
快乐(ynsfeed) 发表:2.7 稳定性试验这个试验的目的是什么?

0

精
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zhaoyongzi

第7楼2010/12/04

属于系统适应性试验吧
阿喜(qweaxi) 发表:呵呵，是看看这个东西稳定不，在这种状态下是否可以长时间不变

0

孟

第8楼2010/12/06

样品的取样是否有点代表性不强？为什么不多取几包，混匀后研磨细粉取样。

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乐果

第9楼2010/12/07

不是学医的不太懂
阿喜(qweaxi) 发表:呵呵，确实挺大额，有可能抗病毒就是他起的作用

0

19861005

第10楼2010/12/07

呵呵，黄芩我们实验室有人在做，据说抗病毒活性挺强的

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