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中文摘要
Abstract
〓猪哥哥〓
第1楼2010/12/10
泽泻为泽泻科植物泽泻 Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干茎。性味甘、寒,归肾、膀胱经。用于小便不利,水肿胀满,泄泻尿少,痰饮眩晕,热淋涩痛,高血脂[1]。
泽泻所含的化学成分比较复杂,主要含三萜类,倍半萜类,二萜类等成分。泽泻醇 A(alisol A)及其乙酸酯、泽泻醇 B(Alisol B)及其乙酸酯、泽泻醇 C单乙酸酯(Alisol C 23-acetate)为首次从泽泻中分离得到的三萜类化合物。此后,各国学者又从不同产地、不同加工方法的泽泻饮片中分离得到了30多个三萜类化合物,其结构多为原萜烷型(Protostane)四环三萜。如24-乙酰泽泻醇A极其衍生物,23-乙酰泽泻醇B及其衍生物,乙酰泽泻醇E,泽泻醇F,泽泻醇H,泽泻醇G等。从生物途径归纳,三萜类都是由23-泽泻醇B衍生而来。泽泻倍半萜类成分主要是愈创木烷型,最早由Oshima从中分离到的是Alismo1和泽泻二醇(Alismoxide)。后又分离陆续出泽泻醇萜A,泽泻醇萜B,泽泻醇萜C,泽泻醇萜E,泽泻醇萜F等[2]。泽泻还含有β-谷甾醇(β-sitosterol)、β-谷甾醇-6′-O-硬酸脂、硬脂酸、甘油醇-1-硬酸脂、三十烷[3]、胆碱[4]、植物凝聚素[5]、泽泻多糖PH[6]、PIIIF[7]、生物碱,黄酮大黄素,淀粉,蛋白质,氨基酸,等成分[8]。
现代泽泻药用有生泽泻、盐泽泻、麸炙泽泻三个主要品种。生泽泻:除去杂质,稍浸,润透,切厚片,干燥[9]。盐泽泻:取泽泻片,加适量盐水拌匀闷透,置锅内,以文火加热、炒至微黄色时,取出放凉。每100kg泽泻用盐2kg[10]。麸炙泽泻先将锅烧热,撒入麦麸待冒烟时,投入泽泻片不断翻炒。炒至药物呈黄色时取出,筛去麦麸放凉。每100kg泽泻用麦麸10~l5kg[9]。樟帮麸炒泽泻:先将锅内烧热,撒入麸皮,待冒烟时,加入泽泻片,不断的翻动,炒至药物表面呈金黄色取出,筛去麸皮,放凉。每泽泻100公斤,用麦麸10公斤[10]。泽泻性味甘,寒。归肾、膀胱经。具有利小便,清湿热的功能。用于小便不利,水肿涨满,泄泻尿少,痰饮眩晕,热淋涩痛,及高血脂等症。泽泻生品以利水渗湿为主,用于小便不利,水肿,泄泻、淋浊,湿热黄疸,湿热带下,痰饮等症。盐炙后能够引药下行,增强滋阴,泻热,利尿的作用,并利尿而不伤阴。用于小便淋涩,遗精淋漓,腰部重痛等症。麸炒后寒性缓和,以渗湿和脾,降浊以生清为主。用于脾湿泄泻,久泻等症[11]。
泽泻药材等级的传统划分以块茎个头大小判断,而现代研究泽泻质量的忧劣多以药材中泽泻醇A24-乙酸脂,泽泻醇B23-乙酸脂的含量作为评价标准。
〓猪哥哥〓
第2楼2010/12/10
一 仪器与试药
(一)仪器
Agilent 1100 Series 高效液相色谱系统
Agilent 1100 色谱工作站
UV检测器
DAD检测器
Hypersil ODS C18色谱柱(4.6mm×200mm 大连依利特公司)
KQ318T超声手饰清洗器(昆山超声仪器厂)
80-2离心机(深圳沙关角国华仪器厂)
分析天平(梅特勒公司)。
(二)试药
泽泻药材:所有药材均樟树天齐堂提供。
对照品:泽泻醇B-23-乙酸酯(对照品)
化学试剂:乙腈为色谱纯;甲醇(分析纯,色谱纯);水为双蒸水。
二、实验方法与结果
(一)检测波长的选择
取一定浓度的泽泻醇B-23-乙酸酯甲醇溶液20μl注入高效液相色谱仪中。从所获得的二极管阵列检测图谱里,在200nm~400nm范围内选择对照品的最大吸收波长值,结果表明泽泻醇B-23-乙酸酯的最大吸收波长值在208 nm处。因此,选择测定波长为208 nm。见下图一,图二。
〓猪哥哥〓
第4楼2010/12/10
(二)色谱条件的建立
色谱柱:Hypersil ODS C18柱(4.6mm×200mm,5μm)
流动相:乙腈﹕水=78﹕22
流速:1ml/min
检测波长:208 nm
柱温:25℃
在该色谱条件下,样品实现分离(R≥1.5,理论塔板数≥2500,对称因子在0.8~1.2之间)。
(三)供试液的制备研究
3.1提取溶剂的选择
取泽泻药材粉末(过80目筛)6份,每份约0.5g,精密称定,置离心试管中,其中3 份分别加入乙腈10ml,另三份分别加入甲醇10ml,浸渍15min,超声处理30min,离心10min(转速为3500r/min),分离上清液,剩余残渣如上法处理,分离上清液。合并上清液,置25ml的容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。吸取20μl样品液进样,记录峰面积,计算含量。结果表明乙腈、甲醇提取效率相当,故选择甲醇为提取溶剂。结果见表3。
表3 不同溶剂对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯的提取能力比较
溶剂/含量(%) | 甲醇 | 乙腈 |
1 | 0.2075 | 0.2064 |
2 | 0.2081 | 0.2079 |
3 | 0.2067 | 0.2092 |
平均值 | 0.2074 | 0.2078 |
〓猪哥哥〓
第5楼2010/12/10
3.2提取方法的选择
取泽泻药材粉末(过80目筛)6份,每份约0.5g,精密称定,其中3份置离心试管中,加入甲醇10ml,按二.(三).1项下操作。另三份分别置平底烧瓶中,各加入20ml甲醇,精密称重,回流法提取3小时,放冷,补足损失重量,滤过,吸取续滤液15 ml,转移至25ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀。吸取20μl样品液进样,记录峰面积,计算含量。结果表明,超声提取法提取效果好。结果见表4。
表4 不同方法对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯的提取能力比较
方法/含量(%) | 回流法 | 超声法 |
1 | 0.06215 | 0.2075 |
2 | 0.06374 | 0.2081 |
3 | 0.05948 | 0.2067 |
平均值 | 0.06179 | 0.2074 |
表5 超声时间对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯提取的影响
时间(min)/含量(%) | 10 | 20 | 30 |
1 | 0.2065 | 0.2101 | 0.2075 |
2 | 0.2042 | 0.2056 | 0.2081 |
3 | 0.2077 | 0.2067 | 0.2067 |
平均值 | 0.2061 | 0.2075 | 0.2074 |
表6 超声次数对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯提取的影响
超声次数/含量(%) | 超声1次 | 超声2次 |
1 | 0.2007 | 0.2075 |
2 | 0.2008 | 0.2081 |
3 | 0.2032 | 0.2067 |
平均值 | 0.2016 | 0.2074 |
〓猪哥哥〓
第6楼2010/12/10
3.6含量测定方法学考察
3.6.1线性关系考察
精密称定泽泻醇B-23-乙酸酯对照品5.79mg,置50ml的容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。精密吸取5ml、3ml、2ml、1ml、0.5ml、0.2ml,分别置10ml的容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制得系列对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液10μl进样测定,记录峰面积,将测得的峰面积A对浓度C(mg/ml)进行线性回归,得回归方程为:
A=21447.37C+1.262 ;r=0.9999。见下图三。
实验表明,泽泻醇B-23-乙酸酯甲醇溶液在浓度为2.310~57.9μg/ml之间呈现良好的线性关系。
〓猪哥哥〓
第7楼2010/12/10
3.6.2精密度实验
取同一浓度的泽泻对照品溶液(0.01158 mg/ml),连续进样6次,每次进样20μl检测,记录峰面积。结果见表7。
表7 精密度实验结果
进样序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
峰面积 | 249.0 | 248.7 | 251.7 | 247.7 | 249.4 | 250.5 |
RSD | 1.209% |
表8 重现性试验结果
序号 | 保留时间 | 峰面积 | RSD |
1 | 8.972 | 424.3 |
2.882% |
2 | 80972 | 426.2 | |
3 | 8.972 | 430.5 | |
4 | 8.969 | 434.9 | |
5 | 8.958 | 424.0 | |
6 | 8.967 | 416.7 |
表9 稳定性实验结果
时间(h) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 |
峰面积 | 424.3 | 430.5 | 424.0 | 427.5 | 420.3 | 430.5 | 425.9 |
RSD | 3.697% |
表10 加样回收率实验结果
样品重(g) | 加入量(mg) | 测得量(mg) | 回收率(%) | RSD |
0.5004 | / | 0.2079 | / |
3.372% |
0.5000 | 0.7713 | 0.9534 | 96.65% | |
0.4999 | 0.6170 | 0.8512 | 104.27% | |
0.5007 | 0.4628 | 0.6836 | 102.78% | |
0.5002 | 0.3085 | 0.5085 | 97.45% | |
0.4997 | 0.1543 | 0.3563 | 96.18% |
〓猪哥哥〓
第8楼2010/12/10
(四)样品的含量测定
取樟树天齐堂提供的泽泻样品10批,每份约0.5g,精密称定。按样品制备方法制得样品供试液,分别吸取10μl样品液进样,记录峰面积,计算含量。结果见表11。
表11 汇仁集团GAP基地的泽泻样品含量测定结果(n=2)
样品批次 | 含量(g/g) | X |
1 | 0.07737% | 0.08319% |
2 | 0.08622% | |
3 | 0.06728% | |
4 | 0.09423% | |
5 | 0.09079% | |
6 | 0.07990% | |
7 | 0.08252% | |
8 | 0.08306% | |
9 | 0.08951% | |
10 | 0.08100% |