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【求助】关于荧光定量PCR加样量问题

pingzet

2010/12/24

我的cdna样品浓度都是用900ng 的RNA反转录做成的20ul的溶液，那么请问我在加入cdna样品时应该加入多少体积的量？我看到SYBR Premix ex taq(perfecct real time)编号drr041a的试剂盒里面说20ul的荧光定量体系cdna模板加入2ul，但是没有注明浓度是多少，只是说dna模板添加量在100ng以下，而且说反转录反应液作为dna模板时添加量不要超过pcr反应总体积的10%，我用的荧光定量pcr反应总体积是20ul，那么cdna的体积应该不大于2ul了，但是浓度应该多少为好呢？
还有引物浓度我该用多少为好呢，试剂盒上20ul的荧光定量体系是10uM的加入0.4ul。
我的实际浓度和体积可能跟试剂盒上的不一样，但是我该怎么按照自己的900ng 的RNA反转录做成的20ul的溶液来改动试剂盒上的数据呢？
如果做浓度梯度来确定cdna浓度和引物浓度，该怎么浓度梯度为好呢？
我是用900ng的RNA来反转录做成20ul体系，然后不稀释直接取2ul来荧光定量PCR（20ul体系），即我用于荧光定量PCR的cdna模板含量是90ng

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