PCR
可能的原因有:
(1)制胶时要使胶完全融化。
(2)检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。
(3)模板降解或过量,可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新制备模板。模板的使用量请参考说明书。如果目的条带较长,模板是 cDNA,要确认逆转录所用 RNA 的纯度及完整度,逆转录时不加随机引物重新逆转录。
(4)反应程序不够优化,退火温度不合适,可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度;尝试 Touch Down 程序。
(5)酶量加入过多。
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