【讨论】你们实验室的菌种一般是怎么保存的

专家解答
甘油管冷冻保藏法
　　1．试验方法介绍 本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。-20℃保存时间较短。或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。
　　2．效果 该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。

生命版主 22:36:58
液氮超低温保存
　　1．试验原理 本方法是近年推广使用的一种菌种保存法。大多数微生物如病毒、噬菌体，立克氏体，各种细菌、放细菌、支原体，各种丝状菌、酵母、藻类和原虫，特别是一些无法用冻干保存的微生物，都可用此法长期保存。工业微生物高产菌种也逐步采用此法保存。液氮保存的原理是微生物在-130℃以下温度时，它的新陈代谢作用停止，化学反应也消失，而液氮温度可达-196℃，在这种情况下可以长期保存。
　　2．试验步骤
　　1)　安瓿管准备 一般要求用95%料或GG17的玻管制作，以能承受巨大的温差变化而不破损，大小根据需要而定。用印同在管壁上书写菌号，160℃烘干，加棉塞灭菌备用。
　　2)　菌种准备 在最适培养基斜面上培养得到健壮菌种，制成悬浮液，如为不产孢子的真菌，则采用斜面或液体振荡培养，制成菌丝片段。将菌悬淮分装至灭菌安瓿管中，每管0.2～0.5ml，然后用火焰将安瓿熔封。
　　3)　冻结 将熔封后的安瓿管入大慢速冻结器上，以每分钟下降1℃的速度冷冻，当安瓿管温度下降至-35℃时，即可把安瓿管移入液氮内作长期保藏。
　　4)　菌种的复苏培养 直至全部溶化为止，当溶化后即开启安瓿移至培养基内培养，扣作时应特别注意安全，防止爆炸或冻伤，不宜戴线手套，要戴皮手套操作
　　3．试验仪器及试剂
　　1）保护剂 与冷冻干燥保存一样，液氮保存菌种也需要有保护物质，可以用10%的甘油，使用方便、效果好，但有些菌对甘油敏感，效果不佳，可选用其他保护剂，常用的有5%～10%(V/V)二甲基亚砜；20%二甲亚砜加1%蛋白陈；吐温80及0.4mmol聚乙烯氮戊环等，糖类也可作为一种保护剂，但浓度适当加以控制。

菌应选择什么时期保存
最好是对数生长末期（中后期） 一般情况下国内实验室都遵循这个原则

我们就是用-20摄氏度甘油冷冻的
可以保存很久，效果不错。

应助达人

我们以前是砂土管0-4度冷藏保存。

-20度的保存就可以，足够使用了，-70度的话一般实验室很难达到这个要求的

呵呵，我们保存时都没有做这个曲线图，直接根据前人的经验进行培养、保存。
不知其他版友是怎么做的

-20度保存，可以啊！

我们有用超低温冰箱的，-70好像是