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【求助】FITC用LIF检测器为什么不出峰?

毛细管电泳(CE)

  • Beckman P-ACE MDQ的仪器,
    实验条件:运行缓冲液是0.06M的磷酸氢二钠溶液,样品是单纯的FITC,浓度很小,就在进样瓶里放了2颗FITC固体。看起来有很强的荧光。
    仪器条件:10kv和20kv的电压都试过,488nm激发,520nm发射,两个通道Relay都是off(不知这是啥意思),运行时间从15-25min都试过。但是为什么没有峰出来。
    请教高人解答。谢谢啦
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  • sunpengwjh

    第2楼2011/01/17

    之前有冲柱子么?试下反向电压!

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  • ericwong

    第3楼2011/01/18

    进样瓶里放了2颗FITC固体?
    什么意思呢?

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  • katherine7

    第4楼2011/01/18

    在这里,反向电压怎么个用,冲柱子。用什么溶液来反向冲洗,缓冲液?

    sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:之前有冲柱子么?试下反向电压!

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  • hpnewer

    第5楼2011/01/18

    就是放了两粒固体FITC,没有具体称重量,估计在0.1mg左右。在进样瓶中全部溶解的

    ericwong(ericwong) 发表:进样瓶里放了2颗FITC固体?
    什么意思呢?

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  • poplar_yang

    第6楼2011/01/20

    两个通道Relay都是off - should be on
    运行时间从15-25min都试过 - should be less than 20min

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  • heguang

    第7楼2011/01/28

    看起来你的实验有点是乱做的。
    荧光素钠的标准样我们通常用的都是10-6到10-7M作为样品的。
    在高pH条件下,荧光素会被EOF带出来。

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  • ericwong

    第8楼2011/01/30

    样品FITC浓度很小,有多小?
    加入FITC的目的是担心样品的浓度会小得检测不到?

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  • changy5

    第9楼2011/10/19

    这么久了不知道解决没有。我们的仪器用10-12M FITC都可以检测出来。标准方法是用丙酮配成FITC 10-3M的储备液,然后用水逐级稀释到10-12M,用碳酸缓冲液pH7.2分离,这是评价检测器性能的一般操作。不过有一点要注意,FITC猝灭很快,一般几个小时就检测不到,哪怕看起来颜色仍然很亮,所以必须用新鲜配制溶液。

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