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【讨论】NGCE分离DNA,DNA吸附于内壁,怎办呢?

  • katherine7
    2011/02/25
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 用CE分离DNA已有一段时日,但结果还是出不来。DNA吸附于内壁,衍生荧光LIF检测,无样品峰,不知咋回事。请教,请教!
    我用的毛细管:未涂层
    选择的CE模式:含纤维素的NGCE

    我怀疑,是不是所配的含纤维素的分离缓冲液粘性高,增加了DNA的吸附?
    另外,目前我使用的纤维素中含有一些杂质,这些杂质是不是也会增加DNA的吸附呢?

    不知该如何?
    最主要的:我担心含高质量浓度纤维素的分离缓冲液,会不会堵塞毛细管柱?
    若毛细管柱被堵塞,是不是反向冲洗柱子就可以解决呢,用NaOH冲?

    期待支招!期待中……
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  • katherine7

    第1楼2011/02/28

    一般来说,纤维素是可以防止DNA在毛细管内壁吸附的,但是要看使用的纤维素的分子量和浓度。
    杂质的影响不大,进口试剂通常没问题。

    以上信息,高手的指导,拿来分享。

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  • jcok123

    第2楼2011/03/11

    不知你分析的DNA是markers还是基因组DNA,若是marker 的话可以参考这篇文章看看 ,希望对你有帮助。祝好
    Tetrabutylammonium phosphate-assisted separation of multiplex polymerase
    chain reaction products in non-gel sieving capillary electrophoresis

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  • katherine7

    第3楼2011/03/15

    这篇文章很好,针对这篇文章,我之前给你发过站内信,有几个问题想咨询你,但貌似信在站内迷失了。
    我目前在做Marker的分离,但出峰情况常不能重复。
    不知你们是否有遇到这类问题,又是如何解决的?

    jcok123(jcok123) 发表:Tetrabutylammonium phosphate-assisted separation of multiplex polymerase
    chain reaction products in non-gel sieving capillary electrophoresis

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  • heguang

    第4楼2011/03/16

    DNA的动态涂层是很好做的。你的纤维素浓度在1%-10%都会有涂层效果,不会让DNA吸附。
    你的问题应该是在检测上,肯定是没有检测到你的样品。你用的什么荧光染料?怎么染的DNA?
    如果你有紫外检测器,你可以用紫外做一下检测,估计紫外上都能出峰了。

    katherine7(katherine7) 发表:这篇文章很好,针对这篇文章,我之前给你发过站内信,有几个问题想咨询你,但貌似信在站内迷失了。
    我目前在做Marker的分离,但出峰情况常不能重复。
    不知你们是否有遇到这类问题,又是如何解决的?

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  • katherine7

    第5楼2011/03/17

    已经可以检测到我的样品峰了,但并不是每次都可以。是因为重复性太差了吗?

    heguang(heguang) 发表:[DNA的动态涂层是很好做的。你的纤维素浓度在1%-10%都会有涂层效果,不会让DNA吸附。
    你的问题应该是在检测上,肯定是没有检测到你的样品。你用的什么荧光染料?怎么染的DNA?
    如果你有紫外检测器,你可以用紫外做一下检测,估计紫外上都能出峰了。

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