【求助】Sephadex LH-20凝胶色谱法分离高分子物质

应助达人

楼主是打算自己做凝胶色谱柱子？
可以参考填充柱的注意事项。
Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，特点： 1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济地大规模制备各种天然产物 2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身，分离结构非常相近的分子 3、载量可高达300mg样品/ml凝胶，极少需要再生，分离效果可保持十几年不变。

应助达人

关于Sephadex LH20 的信息，可以找你所购买的供应商那里得到信息，百度上有简单的介绍：
洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
分离技巧：
（1） 流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。 　　（2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。 　　（3） 馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。 　　（4） 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。 　　（5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质 　　（6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量文献参考。 　　（7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。

谢谢您的回帖，我是想外送样品别人做的，。不晓得哪里可以。。

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