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【求助】样品物质测定出峰问题，怎么办？？

minimoutai

2011/03/16

液相色谱（LC）

各位，小弟有一问题想请教：

年前用大环抗生素的手性柱分离一个带氨基的化合物（PKa=9.6），TNND，用文献上的报道去做，流动相为
甲醇：乙腈：TEA（v/v/v）=80:20:0.05，走了5针标准品（溶于甲醇，c=200ppb），峰性和分离度都非常好，年后继续做，一样的条件一样的化合物，可是死活不出峰，想来想去，找到色谱柱的说明书，发现允许的PH使用范围是3-7，把配制的甲醇乙腈TEA流动相测了一下PH值，11左右，天哪。接下来用甲醇冲了一整夜，用说明书上,推荐的再生色谱柱的流动相NH4OAC（50mM ）/乙腈=50:50冲了3-4h，结果还是不出峰，接下来用水：甲醇=90:10去冲。今天想看看有没有效果，可是不敢再用那个PH=11的甲醇乙腈 TEA流动相了，就用另一篇文献上的甲醇：TEA：HAC=100:0.2:0.1（流动相PH=7.3左右）去走样，发现跟文献上报道的一样在 10min左右有两个峰，不过峰面积十分十分小（只有0.003左右的信号，年前正常信号在0.13左右），很郁闷啊~~~~

有几个问题：
（1）为什么会出现不出峰或者出峰非常非常低的情况啊？
（2）接下来如何去处理色谱柱？用什么流动相去恢复？
（3）问过一些老师，分析色谱柱可能被碱性太强的TEA给覆盖了活性点，应该在酸性环境下去恢复。

我想听听各位专家的意见，帮帮忙~~~~~~~~

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minimoutai

第2楼2011/03/19

0.l%的甲酸不太行，PH＜3，换成乙酸吧，试试看看

用0.1%乙酸冲过后，发现有信号了，不过很弱~~~~请教大家！！

0

zchlucky

第3楼2011/03/20

碱性物质溶解硅胶基质，水/甲醇、乙腈梯度冲洗，要不行柱子就报废了，或者挖去柱头填料填新的。

0

有水有渝

第4楼2011/03/21

应助达人

你每次检测完毕都是怎么清洗色谱柱的？

0

senw

第5楼2011/03/21

额，这个问题我也遇到过，按照再生方法冲洗结果柱压飙升，柱子废掉了：（

0

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