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【求助】SDS-Page蛋白条带总是很粗,求原因分析

  • whrongjuan
    2011/03/21
  • 私聊

电泳仪

  • 悬赏金额:10积分状态:未解决


  • 最左边的是工作标准品,大家能不能帮我分析下,蛋白条带那么宽的原因呀,还有,怎么下面会有阴影呢,实在是思考不出来是什么原因。
    我怀疑过是不是配胶的溶液PH不对?就重新配了,APS也是新配的。
    是配胶时候没有混合均匀?就加大了摇匀的时间。怀疑是凝胶不充分?就35度环境下凝胶,但是都还是没有什么变化,真折磨人呀
    求高人指点!
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  • whrongjuan

    第1楼2011/03/22

    tianru的爸爸,进来帮忙解决下吧

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  • 机枪射手

    第2楼2011/03/22

    有好几年没有做过电泳了……
    pH值确定准确吗?可以尝试增加浓缩胶的长度或者调整电压

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  • whrongjuan

    第3楼2011/03/23

    高手呀,救命啊,

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  • tianru的爸爸

    第4楼2011/04/06

    现在应该是你的目标蛋白出现的问题:其它蛋白的结果还是可以看清楚的,并且蛋白条带分离的效果也可以,只是目标蛋白处有严重的问题——前展。

    你的蛋白溶解性如何?如果不好的话,把整个体系的SDS加倍量(正常应该是0.1%的SDS,必要时加量,甚至更多)。如果很好,再检查盐浓度,你的样品盐浓度是否与电泳用样品缓冲液的盐浓度相当,差的多(高的多不好,低的多,也不好),就用透析或类似的方法换换液再电泳。

    另外降低电压可以减少拖尾,一般至少要降低25%的电压才有显著效果。

    必要时加一个BSA的样品作对照用(电泳效果对照),这样可以判断是样品有问题,还是电泳体系(电泳胶、样品缓冲液、电极缓冲液、电压电流与温度)有问题。

    有问题再问,大家在一起总会有办法解决的。

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  • 家有宝贝儿

    第5楼2011/05/18

    怀疑是样品本身的问题!
    从胶上看有点象是分离纯化的过程中间品,样品本身的pH,离子强度有会有影响。建议在问题不明确的时候,即使不用标准品,也要加一个对照品,如BSA等,这样才能确定是样品问题,还是电泳的问题了。

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  • zhbvssong

    第6楼2011/12/25

    我做的不多;不过建议还是把电压降低一下,看看效果如何再说
    说不定是由于小问题造成的

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  • renmeng88711

    第7楼2012/01/12

    看你的胶 有点皱眉 应该是胶的浓度不太均匀 然后 你的样品脱盐了么 或者是你的样品溶解性不太好 你上面那块胶是什么条件跑的 你跑的也是不连续SDS-PAGE电泳么 你可以换一下电泳缓冲液 再试试

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  • renmeng88711

    第8楼2012/01/13

    样品条带粗 可以用不连续试一下 再说了 你可以减小上样量的 你上多少微升啊

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  • okwqj

    第10楼2012/01/17

    有标准品和样品对照可以明确一点,出现以上情况不是样品本身原因。可能原因有以下:
    1.可以肯定的一点你的上样量过大。
    2.再确定一下上样缓冲液是不是有问题?
    3.确定分离胶是否充分凝好?
    4.也可能像“tianru的爸爸”说的,你的样品盐浓度是否与电泳用样品缓冲液的盐浓度相当。

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