【分享】细菌对于碳水化合物的代谢试验

　2.氧化-发酵试验（O/F试验）
　
　　（1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型。氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解的，称为发酵型。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。利用此试验可区分细菌的代谢类型。
　　（2）培养基：Hugh-Leifson培养基 　　（3）方法：将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡（或其他矿物油），高度不少于1cm.将培养基于35℃培养48h或更长。
　　（4）结果：两支培养基均无变化为产碱型或不分解糖型；两支培养基均产酸为发酵型；若仅不加石蜡的培养基产酸为氧化型。
　　（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别。

　3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
　
　　（1）原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG），而生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也可检出。
　　（2）试剂：0.75M ONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸馏水中，在加入缓冲液（6.9g NaH2P04溶于45ml蒸馏水中，用30%NaOH调整pH为7.0，再加水至50ml）5ml，置4℃冰箱中保存。0NPG溶液为无色，如出现黄色，则不应再用。
　　（3）方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。
　　（4）结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。
　　（5）应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。
　

4.七叶苷水解试验
　
　　（1）原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的二价铁离于反应，生成黑色的化合物，使培养基呈黑色。
　　（2）培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。
　　（3）方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。
　　（4）结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性医学教|育网搜集整理。
　　（5）应用：主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。

　5.甲基红试验
　
　　（1）原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降至4.5以下，当加入甲基红试剂则呈红色，为甲基红试验阳性。若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醚、气体和水等），则培养基的酸度仍在pH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，是为阴性。
　　（2）培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。
　　（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中，培养2～4d，于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。
　　（4）结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。
　　（5）应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。此外肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性 。

　6.V-P试验
　
　　（1）原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中，被空气中的氧氧化为二乙酰，进而与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色化合物，则为V-P试验阳性。若培养基中胍基含量较少，则可加入少量含胍基化合物，如肌酸或肌酐等。试验时加入a-萘酚可加速此反应。
　　（2）培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基医学教|育网搜集整理。
　　（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养48h后加入甲液（6% α-萘酚酒精溶液）和乙液（40% KOH溶液），振摇。
　　（4）结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。
　　（5）应用：本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性

　细菌对于蛋白质和氨基酸的代谢原理为：不同种类的细菌分解蛋白质的能力不同。细菌对蛋白质的分解，一般先由胞外酶将复杂的蛋白质分解为短肽（或氨基酸），渗入菌体内，然后再由胞内酶将肽类分解为氨基酸。

　1.明胶液化试验
（1）原理：某些细菌可产生一种胞外酶-明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体的明胶培养基成为流动的液体。
（2）方法：将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于22℃培养7d，逐日观察结果。若用35℃孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察结果前，先置4℃冰箱内30min，再看结果。
（3）结果：培养基呈液化状态为阳性。
（4）应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外多数假单胞菌也能液化明胶。

　　2.吲哚（靛基质）试验

（1）原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚（靛基质），当加入吲哚试剂（对位二甲氨基苯甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚。
（2）培养基：蛋白胨水培养基。
（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养24～48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。
（4）结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。
（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

　3.硫化氢试验

（1）原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）产生硫化氢，硫化氢遇铅或亚铁离子则形成黑褐色的硫化铅或硫化铁沉淀。此试验可间接检测细菌是否产生硫化氢。
（2）培养基：醋酸铅培养基。
（3）方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基，于35℃培养24～48h观察结果。
（4）结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。
（5）应用：主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。

　4.尿素分解试验

（1）原理：某些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性。
（2）培养基：尿素培养基。
（3）方法：将待检菌接种于尿素培养基，于35℃培养18～24h观察结果。
（4）结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。
（5）应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性。另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。