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【求助】毛细管电泳峰分不开,问题出在哪儿?

毛细管电泳(CE)

  • 最近开始做毛细管电泳研究药物与蛋白质的相互作用,贝克曼电泳仪,紫外检测器,发现人血清白蛋白和中性物质DMF以及甲醇的出峰时间相差不多,0.2M,0.02M,0.05M的磷酸缓冲液都试了(pH=7.4和7.8),峰还是分不开,而且中性物质DMF和甲醇都出倒峰。这些现象的出现到底是什么原因引起的呢?是管内没有电渗流吗?怎么检测电渗流呢?非常感谢各位有经验的大侠给予指导。谢谢。
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  • ericwong

    第1楼2011/05/23

    DMF和甲醇就是用来检测电渗流

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  • zxpshujie

    第2楼2011/05/23

    谢谢,那为什么电渗流峰是倒峰呢? 电渗流峰和蛋白质峰为什么分不开呢?试验了很多次,都是这样的。

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  • ericwong

    第3楼2011/05/24

    用来检测电渗流的甲醇的峰就是倒峰。
    没有分开,那么就改变缓冲液,比如pH值、浓度、组成等。
    用毛细管电泳可以检测HSA与药物的相互作用的,以前有人做过,可以看看文献。

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  • zxpshujie

    第4楼2011/05/24

    谢谢,本来想上传个图,可是不知道怎么上传。你能够说的再详细一些吗?

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  • ericwong

    第5楼2011/05/24

    可以看看以前是如何用毛细管电泳研究药物与蛋白质之间的作用的。我记得这方面的文献也不少

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  • zxpshujie

    第6楼2011/05/24

    好的,谢谢。希望有机会能够与你多多联系。

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  • heguang

    第7楼2011/05/25

    很显然,你的毛细管是有电渗流的,否则甲醇和DMF这类中性物不会出峰,甲醇出倒峰很正常,本来就应该出倒峰的,吸收比buffer还弱。
    你用甲醇和DMF的目的是什么?是电渗流标记?那就用DMF一个就够了。
    你白蛋白的浓度多少?不要太高,太高的话,电流会很不稳定,毛细管也很容易脏。
    每次样品进完了,都用NaOH清洗毛细管。

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  • zxpshujie

    第8楼2011/05/26

    非常感谢!可是为什么电渗流峰和蛋白质峰分不开呢?请问您还有什么好的建议吗?

    heguang(heguang) 发表:很显然,你的毛细管是有电渗流的,否则甲醇和DMF这类中性物不会出峰,甲醇出倒峰很正常,本来就应该出倒峰的,吸收比buffer还弱。
    你用甲醇和DMF的目的是什么?是电渗流标记?那就用DMF一个就够了。
    你白蛋白的浓度多少?不要太高,太高的话,电流会很不稳定,毛细管也很容易脏。
    每次样品进完了,都用NaOH清洗毛细管。

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  • ericwong

    第9楼2011/05/26

    为什么一定要将电渗流峰和蛋白质峰分开呢?
    您所做的是药物与蛋白质之间的作用,为什么这么关心电渗流的峰?

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  • heguang

    第10楼2011/05/26

    要看你的蛋白峰出在DMSO前面还是后面,如果出在前面,那就降低pH,如果出在后面,就升高pH。
    为什么?动动脑筋,想一下。

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